動(dòng)物源性修復(fù)材料的病毒滅活與免疫原的觀察.pdf

1、研究目的：通過查閱文獻(xiàn)資料了解動(dòng)物源性修復(fù)材料技術(shù)研究進(jìn)展與行業(yè)前景。參照國家注冊法規(guī)、國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)以及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)要開展動(dòng)物源性軟組織修復(fù)材料和硬組織修復(fù)材料病毒滅活工藝效果和免疫安全性研究，為產(chǎn)品臨床推廣應(yīng)用提供基礎(chǔ)依據(jù)。
　　研究方法：本課題為了驗(yàn)證2M NaOH30min病毒滅活工藝的有效性，選取了PRV、VSV、PPV和EMCV四種指示病毒用于生物骨材料病毒滅活效果評價(jià)；選取了BVDV、IBRV和CPV三種指示病

2、毒用于生物膜材料病毒滅活效果評價(jià)。攜帶病毒的生物骨材料經(jīng)過2M NaOH溶液浸泡，分別于0 min、5 min、10 min、15 min、30 min取樣，進(jìn)行產(chǎn)品滴度檢測和敏感細(xì)胞培養(yǎng)檢測，確定各時(shí)間點(diǎn)病毒滅活效果。攜帶病毒的生物膜材料則經(jīng)過2M NaOH溶液浸泡，于30min取樣，進(jìn)行產(chǎn)品滴度檢測。根據(jù)產(chǎn)品注冊要求，本課題動(dòng)物源修復(fù)材料病毒滅活效果以病毒滴度下降4個(gè)Log以上作為最終評價(jià)指標(biāo)。
　　本課題通過機(jī)體血清中IgG

3、、IgM和補(bǔ)體C3表達(dá)量的變化情況，評價(jià)動(dòng)物源性生物膜材料和生物骨材料的免疫安全性。生物骨材料選擇兔橈骨骨缺損植入途徑，分別在2周、4周、12周和24周進(jìn)行血清中IgG、IgM和補(bǔ)體C3含量檢測，了解生物骨植入機(jī)體后引起的體液免疫應(yīng)答效果。生物膜材料選擇SD大鼠皮下植入途徑，分別在2周、4周和6周進(jìn)行血清中IgG含量檢測，了解生物膜植入機(jī)體后引起的體液免疫應(yīng)答效果。
　　研究成果：生物骨材料經(jīng)過病毒滅活處理后均無可以檢測到的PRV

4、、VSV、PPV、EMCV，證實(shí)可分別使PRV、VSV、PPV、EMCV的滴度均下降4個(gè)Log以上。對于未能檢測到病毒滴度的樣品，在敏感細(xì)胞上盲傳3代，未能觀察到細(xì)胞病變。生物膜材料經(jīng)過病毒滅活處理后，也可使能BVDV、IBRV和CPV三種指示病毒的病毒含量降低4個(gè)Log以上。氫氧化鈉處理工藝的病毒滅活效果顯著，避免了動(dòng)物源修復(fù)材料病毒傳播，規(guī)避了人畜共患病等風(fēng)險(xiǎn)，本項(xiàng)目研究的牛源生物骨和生物膜動(dòng)物源修復(fù)材料病毒滅活完全。
　　生

5、物骨材料免疫原安全性研究中，柱形生物骨組和顆粒形生物骨組的補(bǔ)體C3、IgG、IgM含量較正常對照組和假手術(shù)對照組水平增高，尤以骨折后兩周明顯，表明兩周左右機(jī)體對于植骨材料有明顯排異反應(yīng)。后期各試驗(yàn)組血清中補(bǔ)體 C3、IgG、IgM含量均下降，生物骨植入組與假手術(shù)組無顯著性差異。
　　生物膜免疫原安全性研究中，各處理組血清中IgG濃度與空白對照組相比均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，生物膜材料植入實(shí)驗(yàn)組與假手術(shù)對照組血清IgG濃度沒有顯著性統(tǒng)計(jì)