激素對人子宮骨膜β1,4-半乳糖基轉移酶Ⅰ表達的影響及與EGFR信號通路相關性研究.pdf

1、目的:
　　 探討雌、孕激素作用下，著床前子宮內(nèi)膜（RL95-2細胞）β1，4-GalT-Ⅰ表達變化及對胚胎與子宮內(nèi)膜黏附的影響，分析不同雌、孕激素作用下對EGFR相關信號通路表達的影響，調控子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達后EGFR表達的相應變化，進一步分析子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ調控胚胎著床的分子機制，探討與EGFR信號通路的相關性。
　　 方法:
　　 (1)通過體外著床模型（以人子宮內(nèi)膜癌細胞RL

2、95-2模擬著床前子宮內(nèi)膜，以人絨毛癌細胞JAR模擬著床前胚胎），改變子宮內(nèi)膜環(huán)境雌、孕激素的水平:免疫印跡技術檢測雌、孕激素對子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達的影響，免疫細胞化學染色分析雌、孕激素對β1，4-GalT-Ⅰ半乳糖基化的改變;RCA-1Lectin-blot技術分析雌、孕激素作用下Galβ1-4GlcNAc糖蛋白分支形成情況;檢測雌、孕激素影響子宮內(nèi)膜EGFR相關信號通路蛋白表達水平;免疫印跡技術分析孕激素水平與p-EG

3、FR表達相關性;計數(shù)JAR細胞在RL95-2細胞上黏附率，分析與雌、孕激素水平的關系;(2)將β1，4-GalTⅠ基因過表達質粒、干擾質粒、空質粒和干擾對照質粒分別轉染RL95-2細胞，分析調控子宮內(nèi)膜β1，4-GalTⅠ表達水平后，JAR細胞在RL95-2細胞上黏附變化情況;應用免疫印跡技術分析調控子宮內(nèi)膜β1，4-GalTⅠ表達對EGFR表達的影響。
　　 結果:
　　 (1)子宮內(nèi)膜β1，4-GalT-Ⅰ表達與雌、

4、孕激素呈劑量、時間-效應關系，雌激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h(P＜0.01)，孕激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h(P＜0.01);(2)子宮內(nèi)膜雌、孕激素可促進JAR細胞對RL95-2細胞的黏附作用，黏附率:雌激素組(84.7±0.4％)、孕激素組(91.4±0.7％)、雌孕聯(lián)合組(88.0±0.9％)，均明顯高于正常組(78.3±0.7％)(P＜0.01)，以孕激素上調作用更為顯著;孕激素組、雌孕聯(lián)合組可明

5、顯上調子宮內(nèi)膜EGFR、NF-κB、ICAM-1和Galβ1-4GlcNAc的表達(P＜0.01);雌激素組、孕激素組、雌孕聯(lián)合組明顯上調β1，4-GalT-Ⅰ、EGF蛋白表達(P＜0.01);(3)孕激素作用下促進子宮內(nèi)膜EGFR磷酸化水平(P＜0.01);(4)子宮內(nèi)膜細胞轉染β1，4-GalTⅠ基因調控質粒后，JAR細胞在RL95-2細胞上的黏附率分別為:過表達組(90.5±1.3％)高于正常組(77.9±0.9％)、空載體組(7

6、9.0±1.9％)和干擾對照組(80.1±1.6％)，干擾組黏附率則顯著降低(55.2±0.6％)(P＜0.01);同時檢測到干擾組EGFR表達水平上調，過表達組無明顯變化(P＜0.01)。
　　 結論:
　　 (1)雌、孕激素可調節(jié)子宮內(nèi)膜細胞β1，4-GalT-Ⅰ的表達（呈現(xiàn)時間、劑量依賴關系），促進JAR細胞對RL95-2細胞的黏附作用;(2)孕激素可上調子宮內(nèi)膜細胞EGFR相關信號通路分子表達來調控胚胎著床。(3