葛根素干預(yù)核因子-κB防治動脈粥樣硬化的實驗研究.pdf

1、葛根素(Puerarin，Pue)是野生植物葛根中異黃酮的主要有效成分之一，研究表明葛根素具有多種生化和藥理活性例如降低膽固醇、抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤、改善胰島素抵抗等作用。然而，葛根素干預(yù)NF-κB的活化對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子及高脂飲食所致動脈粥樣硬化的影響未見報道，本實驗則是研究葛根素干預(yù)NF-κB的活化對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子及高脂飲食所致主動脈壁動脈粥樣硬化的影響，探討葛根素防治動脈粥樣硬化的機制。本研究分為兩個部分：

2、
　　 第一部分：葛根素通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路抑制TNF-Q誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子。
　　 目的：通過研究葛根素對腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)與NF-κB活化的影響，探討葛根素調(diào)控炎癥狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子的機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分為對照組、TNF-α組、葛根素低、中、高濃度組(10，20，50μmol/ml)。不同濃度的葛根素和內(nèi)皮細(xì)胞

3、預(yù)孵育后加入TNF-α進(jìn)行刺激。應(yīng)用Westernblot與CELL-ELISA分別檢測各組細(xì)胞漿蛋白與細(xì)胞上黏附分子的水平；應(yīng)用Westernblot檢測各組細(xì)胞漿蛋白IκB-α及各組細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)NF-κB p65水平。
　　 結(jié)果：葛根素呈濃度依賴性抑制TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞漿蛋白與細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)；另外，葛根素呈濃度依賴性抑制TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞漿蛋白IκB-α降低及核蛋白NF-κB p65增加。

4、>　　 結(jié)論：葛根素能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子的表達(dá)，可能與其抑制NF-κB活化有關(guān)，提示其具有抗動脈粥樣硬化的作用。
　　 第二部分：葛根素通過干預(yù)兔主動脈壁NF-κB活化抑制其表達(dá)黏附分子和改善動脈粥樣硬化。
　　 目的：葛根素對高脂飲食兔主動脈壁組織的核因子-κB(NF-κB)活化的影響及黏附分子的表達(dá)，探討葛根素抗動脈粥樣硬化的機制。
　　 方法：24只新西蘭兔分為3組：⑴正常飲食

5、組；⑵高脂飲食組；⑶葛根素干預(yù)組：高脂飲食同時給予注射葛根素。ELISA檢測各組0、8、16周的血漿黏附分子水平。16周后動物被處死，肉眼和光鏡下觀測各組主動脈壁的病理學(xué)變化，免疫組化和PCR分別檢測主動脈壁黏附分子的蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)，Westernblot檢測主動脈壁組織中磷酸化抑制因子-α(p-I-κB)與NF-κB抑制因子-α(I-κB-α)蛋白質(zhì)的表達(dá)，ELISA檢測主動脈壁組織勻漿中NF-κB p65的水平。
　　

6、 結(jié)果：與正常飲食組比較，高脂飲食引起兔主動脈壁顯著的動脈粥樣硬化，組織中和血清中的黏附分子表達(dá)明顯增高，主動脈壁組織p-IκB-α顯著增加，IκB-α顯著減少，同時伴有主動脈壁組織核內(nèi)NF-κB p56的水平增加；葛根素能明顯抑制高脂飲食引起兔的主動脈壁和血清中的黏附分子主動脈壁的動脈粥樣硬化，同時其能抑制主動脈壁組織中p-IκB-α的增加和IκB-α的減少，同時抑制主動脈壁細(xì)胞的NF-κBp56核內(nèi)轉(zhuǎn)移。
　　 結(jié)論：NF