大豆規(guī)?；D基因體系構建.pdf

1、大豆是現代農業(yè)十分重要的農作物之一，富含蛋白質、植物油和多種對人體有益的成分，是人類食品中主要的植物蛋白來源，同時也是重要的工業(yè)原料和牲畜飼料。隨著科技的發(fā)展和人們生活水平的提高，大豆的產量逐漸開始無法滿足人們的生活需求，而傳統(tǒng)的育種方法又無法有效解決這一矛盾。于是自1988年開始，越來越多的研究人員開始利用基因工程技術，培育具有優(yōu)良性狀的大豆品種，并取得了一定的成就。但大豆的基因轉化一直存在著轉化率低、重復性差等問題。因此，建立高效、

2、穩(wěn)定的大豆轉化技術體系仍是目前國內外學者研究的熱點之一。
　　 本實驗采取目前最常用的農桿菌介導的轉化方法，以多個大豆品種的子葉節(jié)外植體為受體材料，進行了大豆遺傳轉化實驗。并且針對轉化過程中的重要步驟實施了一系列優(yōu)化措施，旨在通過提高農桿菌侵染效率、叢生芽的誘導效率等，進一步提高大豆再生效率和轉化效率，建立一種穩(wěn)定性好、轉化率高的大豆轉化技術體系，為今后的大豆分子育種和基因功能研究打下良好的基礎。
　　 本實驗主要研究成

3、果如下：
　　 1、高再生能力的大豆基因型篩選。實驗采用含PBI121質粒的農桿菌EHA105和GV3101侵染7個大豆品種的子葉節(jié)外植體，發(fā)現不同大豆基因型之間再生效率差異明顯，并從中篩選出中黃10號、文豐7號兩個再生效率較高的大豆品種。
　　 2、降低了組織培養(yǎng)過程中的褐化現象。通過對共培培養(yǎng)基進行半胱氨酸(L-cy)濃度的梯度試驗，發(fā)現L-cy濃度為400 mg·L-1時，能有效地抑制子葉節(jié)外植體的組織褐化現象，提

4、高了外植體的成活效率。
　　 3、降低了殘留農桿菌污染。本實驗通過優(yōu)化共培后的除菌方法，配合除菌劑的使用，大大降低了殘留農桿菌污染的比率，有效地解決了農桿菌介導轉化體系容易造成侵染后的農桿菌殘留污染的現象，保證了轉化實驗的順利進行。
　　 4、提高了叢生芽的誘導效率。通過在恢復期去掉子葉節(jié)外植體第一組新芽的方法，大大提高了外植體誘發(fā)的叢生芽數量，從而提高了再生效率：并以此降低了叢生芽發(fā)育的頂端優(yōu)勢，提高了篩選效率。

5、>　　 5、Thidiazuron(TDZ)的活化效果。TDZ是一種高效的細胞分裂素，本實驗在叢生芽誘導階段添加了適量的TDZ，結果發(fā)現誘導的活性細胞數量得到了大幅度增加。
　　 6、生根培養(yǎng)基的優(yōu)化。通過對多品種的生根誘導實驗，確定了生根誘導高效穩(wěn)定的生根培養(yǎng)基配比及IBA的最適濃度1.0mg·L-1，并且選出了容易發(fā)根的大豆品種中黃10號和文豐7號。
　　 7、優(yōu)化煉苗移栽步驟。本實驗對再生植株的煉苗移栽步驟作了一