BMP2和TGFβ3雙基因真核表達載體的構建與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本實驗旨在擴增BMP2和TGFβ3基因，并構建含有BMP2和TGF-β3的雙基因真核表達載體pIERS-BMP2-TGFβ3，為研究雙基因共轉染間充質干細胞及其在體內(nèi)的表達情況和可能存在的協(xié)同效應奠定基礎。
　　 方法:首先，用PCR方法從質粒pGEMT/BMP2中擴增出BMP2基因全長，并將其連入雙基因真核表達載體pIRES，篩選出陽性重組質粒pIRES-BMP2；其次，用RT-PCR的方法從人胚胎組織擴增出TGFβ3基

2、因全長，將TGFβ3基因連入質粒pIRES-BMP2；用酶切的方法篩選出陽性重組質粒pIRES-BMP2-TGFβ3，并進行測序鑒定。
　　 結果:成功的克隆出BMP2和TGFβ3基因，并將其連接到目的載體pIRES中，雙酶切和質粒測序證實連接正確，且基因的開放閱讀框架正確，pIRES-BMP2-TGFβ3雙基因真核表達載體構建成功。
　　 結論:利用PCR，DNA重組等分子生物學技術，成功構建了雙基因真核表達載體pIR

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