荷花LFY、AP1基因片段的克隆與分析.pdf

1、本研究以碗蓮品種‘紅霞滿天’為材料，采用RT-PCR方法，克隆出LFY基因和AP1基因的片段。為今后獲得LFY基因和AP1基因的全長以及了解荷花的成花分子機理和花期調控奠定了必要的基礎。研究結果如下：
　　 (1)建立了較為完善的荷花樣品總RNA提取和純化方法。通過比較改良Trizo1、CTAB-LiC1法、改良CTAB-LiCl法三種RNA提取方法，總結出適合荷花樣品RNA提取的方法-改良CTAB法。并通過此方法獲得了較為純凈

2、的、完整的總RNA，可以直接用于后續(xù)的RT-PCR反應。
　　 (2)采用RT-PCR技術克隆了荷花LFY基因cDNA片段。克隆得到的LFY基因片段長為431bp，編碼143個氨基酸。序列分析結果表明，該片段推導的氨基酸序列與紅葉藜、蘋果、葡萄、煙草、矮牽牛、甘菊等植物的氨基酸序列一致性分別為95％、95%、94%、94%、94%、93%。系統(tǒng)進化樹分析表明，荷花與蘋果和枇杷親緣關系最近。
　　 (3)采用RT-PCR技

3、術克隆了荷花2個AP1基因cDNA片段，分別命名為NeAP1-1和NeAP1-2。NeAP1-1和NeAP1-2基因片段核苷酸長度均為216bp，編碼72個氨基酸。運用DNAMAN軟件，對NeAP1-1和NeAP1-2的核苷酸和氨基酸序列進行分析，其同源性分別為89.35%和88.89%。序列分析結果表明，NeAP1-1和NeAP1-2的氨基酸序列與其它植物的AP1氨基酸序列同源性均在62%以上。系統(tǒng)進化樹分析表明，荷花與白屈菜的親緣關