小鵝瘟病毒VP3基因疫苗誘導(dǎo)BALB-c小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫的研究.pdf

1、本研究將小鵝瘟病毒VP3基因疫苗以三個(gè)劑量(1μg、3μg和6μg)基因槍轟擊、三個(gè)劑量(50μg、100μg和200μg)肌肉注射分別免疫BALB/c小鼠，同時(shí)設(shè)肌肉注射小鵝瘟弱毒疫苗、空載體pcDNA3.1(+)和生理鹽水為對(duì)照。在免疫后的3 d、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、49 d、63 d、77 d、105 d采抗凝血和凝血兩份，133 d、161 d、189 d、217 d采凝血一份。采用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)(

2、MTT法)、流式細(xì)胞術(shù)(FACS)及間接ELISA分別對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如下： 1．小鼠外周血T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能：①除肌注200μg組外五個(gè)劑量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后外周血T淋巴細(xì)胞都對(duì)ConA有明顯的反應(yīng)性，從第14 d開始增強(qiáng)，第28 d時(shí)達(dá)到最高值，以后開始下降，且與對(duì)照組比較都差異極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)?？蛰d體對(duì)照組在第7-63 d時(shí)還顯著(P<0.0

3、5)高于生理鹽水對(duì)照組。②基因槍轟擊免疫小鼠后外周血T淋巴細(xì)胞對(duì)ConA的反應(yīng)，6μg組>3μg組>1μg組，表現(xiàn)出一定的劑量依賴性。③肌注免疫小鼠后外周血T淋巴細(xì)胞對(duì)ConA的反應(yīng)，100μg組在免疫后21-35 d極顯著(P<0.01)高于50μg和200μg組，而200μg組的反應(yīng)與生理鹽水對(duì)照組相似。④基因槍轟擊組與肌注組比較，二者間無(wú)顯著性差異。⑤基因疫苗組與弱毒疫苗組比較，基因槍轟擊3、6μg組和肌注50μg、100μg組分

4、別在第28 d、7-105 d、28 d、21-35 d都極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)高于弱毒疫苗組。 2．CD4<'+>、CD8<'+>T淋巴細(xì)胞數(shù)：①六個(gè)劑量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后，小鼠外周血CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞值都在第 28 d時(shí)達(dá)到最大值，且在不同的時(shí)間段都極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.05)高于空載體和生理鹽水對(duì)照組。②基因槍轟擊免疫小鼠后

5、，小鼠外周血CD<,4><'+>T淋巴細(xì)胞值6μg組較高，CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞值基因槍轟擊組間差異不顯著。③肌注免疫小鼠后，小鼠外周血CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞值50μg組都高于100、200μg組。④基因槍轟擊組與肌注組比較，小鼠外周血CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞值基因槍轟擊6μg組和肌注50μg組都高于其它各組，其它組之間差異不顯著。⑤基因疫苗組與弱毒疫苗組比較，小鼠外周血

6、CD<,4><'+>、CD<,8><'+>T淋巴細(xì)胞值基因槍轟擊3、6μg組和肌注50μg組都高于弱毒疫苗。 3．小鼠血清中特異性GPV血清抗體IgG動(dòng)態(tài)變化：①六個(gè)劑量的pcDNA-GPV-VP3基因疫苗免疫小鼠后，小鼠血清中特異性GPV血清抗體OD值從第14 d開始升高，第21 d達(dá)到最大值，以后開始下降，且在不同的時(shí)間段都顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于空載體和生理鹽水對(duì)照組。②基因槍轟擊免疫小鼠后，小鼠血

7、清中特異性GPV血清抗體OD值6μg組>3μg組>1μg組，表現(xiàn)出一定的劑量依賴性。③肌注免疫小鼠后，小鼠血清中特異性GPV血清抗體OD值200μg組較高。④基因槍轟擊組與肌注組比較，小鼠血清中特異性GPV血清抗體OD值除200μg組較高外，其它各組差異不顯著。⑤基因疫苗組與弱毒疫苗組比較，小鼠血清中特異性GPV血清抗體OD值基因槍轟擊6μg組和肌注50、200μg組在第21-35 d、21 d都極顯著(P<0.01)或顯著(P<0.0