乙肝病毒X基因(HBVX)慢病毒載體的構建和鑒定.pdf

1、目的：構建在正常組織來源的肝細胞HL7702表達的乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白的基因HBVX的重組慢病毒載體，研究其在體外的感染效率。
　　 方法:采用PCR技術從先前構建的載體真核表達載體pcDNA3-X中擴增出含HBVX基因的DNA片段，用In-Fusion技術構建表達載體，經(jīng)PCR、酶切和單向測序驗證。利用jetPEI轉染試劑三質粒共轉染293T細胞，有限稀釋法計算慢病毒顆粒的滴度。用慢病毒液感染正常組織來源的肝細胞HL7

2、702，96 h后初步觀察慢病毒顆粒的感染情況。Real-time PCR和Western blot法檢測重組細胞HBV X基因的表達。
　　 結果:成功構建HBVX基因的慢病毒表達載體，經(jīng)293T細胞包裝后，慢病毒顆粒濃縮后滴度為4x107IU/m1。用滴度為4x107IU/m1的慢病毒感染正常組織來源的肝細胞HL7702 96h后，被感染的細胞內可見強弱不等的熒光。Real-time PCR和Western blot檢測均證