FIZZ1在動脈粥樣硬化發(fā)病中的作用及其機制.pdf

1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)導(dǎo)致的心腦血管疾病是當(dāng)今人類死亡的首位原因。雖然AS的概念已提出近100年，而且國內(nèi)、外學(xué)者對其發(fā)病機理進行了深入研究，但其病死率仍居高不下，可能與其發(fā)病機制尚不十分明確有關(guān)。關(guān)于其形成的學(xué)說較多，其中Ross提出的“AS是一種炎癥性疾病”備受關(guān)注，他指出AS是動脈壁對各種炎癥損傷的炎癥-增殖反應(yīng)，在此過程中涉及炎癥、內(nèi)膜巨噬細胞聚集、平滑肌細胞的增殖遷移及細胞外基質(zhì)的聚集等諸多環(huán)節(jié)。

2、 FIZZ1(Foundininflammatoryzone1)是2000年發(fā)現(xiàn)的一個因子，研究表明它在缺氧、炎癥等狀態(tài)下循環(huán)單核細胞和激活巨噬細胞中顯著升高，且在缺氧引起肺血管重塑的過程中，F(xiàn)IZZ1可引起肺血管平滑肌細胞的增殖和遷移。如前所述，在動脈粥樣硬化病變中炎癥和缺氧同時存在，激活的單核——巨噬細胞明顯增多，大量的處于活化狀態(tài)的巨噬細胞積聚于動脈粥樣斑塊及周圍動脈組織內(nèi)。因此我們有理由推測，動脈粥樣硬化病變組織中FIZ

3、Z1表達上調(diào)，并可能參與AS的形成和發(fā)展。 本研究擬建立apoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型，測定動脈粥樣硬化組織中FIZZ1的表達；用重組的FIZZ1蛋白刺激體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞增殖和遷移，并探討其可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而為防治AS提供新的思路和理論依據(jù)。 本課題主要研究結(jié)果和結(jié)論如下： 1.應(yīng)用微膠乳凝集法檢測血清超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)表明：雖然AS模型組和羅格列酮干預(yù)組的hs-CRP水平

4、均顯著高于正常對照組，但羅格列酮干預(yù)后，血清hs-CRP水平顯著低于AS模型組。提示羅格列酮具有抑制炎癥反應(yīng)的作用。 2.病理形態(tài)學(xué)結(jié)果表明，正常對照組的內(nèi)膜完整性較好，無動脈粥樣硬化病變形成。AS模型組可見內(nèi)膜完整性破壞，內(nèi)膜下大量的泡沫細胞聚集，形成明顯的動脈粥樣硬化斑塊，而羅格列酮灌胃組泡沫細胞聚集程度及動脈粥樣硬化斑塊面積顯著低于AS模型組，表明羅格列酮具有抗動脈粥樣硬化的作用。 3.應(yīng)用免疫組織化學(xué)和RT-PC

5、R檢測發(fā)現(xiàn)：與正常對照組比較，AS模型組血管組織FIZZ1蛋白和mRNA表達明顯增高，而羅格列酮干預(yù)組血管組織FIZZ1表達明顯降低。 4.重組FIZZ1蛋白濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞(VSMCs)的增殖：3H-TdR法及MTT法均表明，F(xiàn)IZZ1干預(yù)后能顯著地促進VSMCs對3H-TdR摻入及對MTT的攝取和代謝。免疫細胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)IZZ1刺激后VSMCs增殖細胞核抗原(PCNA)的表達增強、陽性

6、細胞數(shù)明顯增多。流式細胞儀檢測細胞周期結(jié)果也表明，重組FIZZ1蛋白刺激后，S期細胞數(shù)明顯增多，而G0/G1期細胞數(shù)明顯減少。多種方法均提示FIZZ1能夠顯著促進VSMCs的增殖。 5.利用Boyden小室觀察到：重組FIZZ1蛋白濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞(VSMCs)的遷移。 6.靜止的VSMCs中加入重組FIZZ1蛋白，顯著地增加了Akt1蛋白的表達，PI3K的抑制劑Ly294002以劑量(10

7、μmol/L～30μmol/L)依賴性的方式抑制FIZZ1誘導(dǎo)的Akt1的表達。 7.靜止的VSMCscyclinD1水平較低，而p21和p27水平較高，加入重組FIZZ1蛋白后，cyclinD1的表達明顯增高，而p21和p27明顯降低。Ly294002以劑量(10μmol/L～30μmol/L)依賴性的方式抑制FIZZ1誘導(dǎo)的cyclinD1表達增高和p21及p27的表達降低。表明PI3K/AKT通路介導(dǎo)了FIZZ1對VSMC

8、s的增殖作用。 8.免疫熒光法表明FIZZ1促進血管平滑肌細胞F-actin的表達，而預(yù)先加入Ly294002可劑量依賴性地拮抗FIZZ1導(dǎo)致的F-actin的表達，提示FIZZ1通過活化PI3K/Akt通路促進VSMCs內(nèi)F-actin的表達，從而促進VSMCs的遷移。 綜上所述，本研究首次表明：動脈粥樣硬化病變組織內(nèi)FIZZ1的表達顯著增強，而羅格列酮可能通過抑制炎癥反應(yīng)顯著降低AS病變組織中FIZZ1的表達；重組F

9、IZZ1蛋白可濃度依賴性地促進體外培養(yǎng)的小鼠主動脈平滑肌細胞的增殖和遷移；FIZZ1促進VSMCs增殖可能是通過誘導(dǎo)PI3K/Akt的活化，而后者又通過上調(diào)cyclinD1的表達，同時下調(diào)CDK抑制劑p21和p27的表達來實現(xiàn)的；FIZZ1通過活化VSMCs內(nèi)PI3K/Akt通路，促進F-actin的表達，從而促進VSMCs的遷移。由此，我們可得出結(jié)論：AS發(fā)生過程中的炎癥反應(yīng)可誘導(dǎo)FIZZ1的表達，F(xiàn)IZZ1又通過激活PI3K/Akt