杜氏鹽藻hsp70基因的克隆及其肌動蛋白基因啟動子驅動bar基因作為轉基因篩選標記.pdf

1、杜氏鹽藻(Dunaliella Salina D.salina)為一種無細胞壁的單細胞真核綠藻,是迄今為止所發(fā)現世界上最耐鹽的植物之一,其抗逆力極強,能在0.05M-5MNaCl的環(huán)境中生存.熱休克蛋白(hsp)70家族是目前已知的最保守的蛋白家族之一.在綠色植物和藻類,不同hsp70基因的編碼產物分布在胞漿、葉綠體和線粒體內,參與新生蛋白質的正確折疊、轉運及其降解,對細胞的生長、分化和各種環(huán)境的適應都起著重要作用.光和熱脅迫均可誘導生

2、成大量的hsp70 mRNA.因此,作為誘導表達產物,其hsp70基因啟動子已經被用于構建轉基因萊茵衣藻表達載體,并得到了成功的轉化.該研究根據hsp70在各物種間高度保守這一特點,克隆得到定位在胞漿的杜氏鹽藻hsp70基因組DNA全長以及其兩側調控序列,并初步探討hsp70 mRNA表達水平以及與光和熱誘導的關系,為下一步杜氏鹽藻表達載體的構建奠定基礎.結論1.PPT對pDSBAR轉化野生型杜氏鹽藻的成功篩選,提示bar基因可能作為轉

3、基因杜氏鹽藻的主要篩選標記基因.2.克隆得到杜氏鹽藻胞漿定位的hsp70基因組DNA序列及其兩側調控序列,其中5'側調控序列中包含有2個熱休克元件.杜氏鹽藻hsp70 mRNA水平增高與光、溫度誘導均有關系,因此,該基因啟動子的克隆為誘導型轉基因杜氏鹽藻表達載體的構建奠定了基礎.該編碼基因中GC/AT比值增高,密碼子有顯著的偏愛性,提示待轉化的外源基因也應該具有相似的密碼子偏愛.3.克隆得到杜氏鹽藻肌動蛋白基因兩側調控序列,該基因5'側