重復(fù)序列和基因組DNA在寬葉野生稻CCDD基因組中的比較分析.pdf

1、1.用栽培稻“廣陸矮4號”(AA)和藥用野生稻(CC)C0t-1 DNA作為探針，對寬葉野生稻(CCDD)進行比較原位雜交分析。同時，利用栽培稻基因組總DNA(gDNA)和藥用野生稻基因組總DNA(gDNA)作為探針，對寬葉野生稻進行基因組原位雜交，作為對照。比較A、C和D基因組之間關(guān)系，并對稻屬異源四倍體的可能起源機制進行了初步探討。在不封阻的情況下，廣陸矮四號Cot-1 DNA探針大概在26條染色體上信號較強，還可以看到同源染色體具

2、有相似的C0t-1 DNA帶型，并對其核型進行了同源性聚類。藥用野生稻C基因組Cot-1 DNA作探針,可以明顯地觀察到信號主要集中在24條染色體上，表明這24條染色體與藥用野生稻C基因組同源性較高，應(yīng)屬于寬葉野生稻C組染色體。D染色體組上也存在一些雜交信號，說明CC和DD基因組之間的中度和高度重復(fù)序列亦具有同源性. 2.采用基因組原位雜交(GISH)技術(shù)來研究稻屬藥用野生稻復(fù)合體中寬葉野生稻(CCDD基因組)和高桿野生稻(CC

3、DD基因組)基因組的關(guān)系。用這兩種野生稻基因組總DNA作為探針分別對寬葉野生稻中期染色體進行原位雜交，雜交結(jié)果顯示寬葉野生稻和高桿野生稻同源性非常高，說明這兩種親緣關(guān)系十分接近，但區(qū)別也非常明顯，為寬葉野生稻和高桿野生稻是不同物種提供依據(jù)，同時根據(jù)同源染色體上的相似信號帶型進行核型的同源性聚類。 3.重復(fù)序列的特點及組成對于研究基因組結(jié)構(gòu)和進化具有重要意義，對重復(fù)序列的研究已經(jīng)逐漸成為植物基因?qū)W研究的重要內(nèi)容。制備植物C0t-1

4、 DNA的傳統(tǒng)方法中，高壓和超聲波打斷DNA的方法不能穩(wěn)定的獲得一定長度的DNA片段，而且有時也受許多因素影響。我們在Zwick等的方法基礎(chǔ)上加以改進，利用DnaseⅠ和DNA聚合酶Ⅰ酶解穩(wěn)定的獲取預(yù)定長度的DNA片斷，結(jié)合S1酶消化獲得C0t-1 DNA，并將提取的C0t-1 DNA與用高壓打斷所提取的C0t-1 DNA進行熒光原位雜交檢測，對比雜交結(jié)果，證明本實驗方法能夠獲得較高質(zhì)量的C0t-1 DNA。 4．用多色基因組熒