PAEs對(duì)原代培養(yǎng)的大鼠脂肪細(xì)胞PPAR-γ2表達(dá)的影響.pdf

1、環(huán)境是人類生存和發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ),然而隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展,許多人工合成的有毒有機(jī)物質(zhì)通過各種途徑進(jìn)入人體,并在人體內(nèi)蓄積,對(duì)人體造成持久性的危害。鄰苯二甲酸酯類化合物(PAEs)就是一種全球性的環(huán)境污染物,能夠干擾人體生殖發(fā)育的多個(gè)環(huán)節(jié),同時(shí)還具有致癌作用。最近研究發(fā)現(xiàn),PAEs在人體內(nèi)的蓄積量達(dá)到了一個(gè)很高的含量,這些研究還提示了雖然地域不同,但PAEs對(duì)人類的潛在危害是很危險(xiǎn)的。還有研究表明,PAEs還可能與人體肥胖有關(guān),由于PAEs

2、蓄積在脂肪組織中,那么PAEs對(duì)人類的危害很可能超過了我們之前評(píng)估的程度。因此,有必要對(duì)PAEs與肥胖的關(guān)系進(jìn)行全方位的研究。本研究建立了大鼠脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,利用PAEs染毒大鼠脂肪細(xì)胞,通過觀察脂肪細(xì)胞的形態(tài)、脂肪顆粒和相關(guān)mRNA等多方面的變化,分析PAEs對(duì)大鼠脂肪細(xì)胞的影響,為研究PAEs與肥胖的關(guān)系提供科學(xué)依據(jù)。本研究主要內(nèi)容包括：
　　 ⑴建立大鼠脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)模型。斷頸處死大鼠,提取大鼠脂肪組織,用消化酶消

3、化脂肪組織,脂肪組織懸液通過不銹鋼細(xì)胞篩過濾,離心之后取沉淀,用無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,對(duì)脂肪細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),觀察脂肪細(xì)胞的變化以確定大鼠脂肪細(xì)胞原代培養(yǎng)的合適條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,大鼠原代培養(yǎng)的合適條件是取大鼠腹股溝及附睪處脂肪組織、Ⅰ型膠原酶消化、消化時(shí)間為90min、用200目孔徑的細(xì)胞篩過濾、1000rpm的轉(zhuǎn)速離心兩次取沉淀重懸細(xì)胞。
　　 ⑵對(duì)脂肪細(xì)胞進(jìn)行PAEs染毒培養(yǎng),觀察脂肪細(xì)胞多方面的變化,從而評(píng)價(jià)PAEs對(duì)脂

4、肪細(xì)胞的影響。主要實(shí)驗(yàn)：①顯微鏡每天觀察脂肪細(xì)胞的形態(tài)變化;②油紅O對(duì)脂肪細(xì)胞進(jìn)行染色,觀察脂肪細(xì)胞中脂肪顆粒的變化;③油紅O染色提取法和MTT比色法檢查脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況;④提取脂肪細(xì)胞的總RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn),分析過氧化物酶體增殖劑受體γ2(PPAR-γ2)mRNA的表達(dá)情況,PPAR-γ2與脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,①通過顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),PAEs處理過的脂肪細(xì)胞由最初的小圓形變化為梭形最后變成橢圓形,隨著培養(yǎng)時(shí)間

5、的增加,大鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)開始出現(xiàn)脂肪顆粒,并逐漸增加,最后部分脂肪顆粒融合為較大的脂肪顆粒,符合脂肪細(xì)胞的發(fā)育規(guī)律。②通過油紅O染色,證實(shí)了在PAEs處理過的大鼠脂肪細(xì)胞中有脂肪顆粒的產(chǎn)生。③通過油紅O染色提取法和MTT比色法,發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)液中PAEs濃度的增加,大鼠脂肪細(xì)胞產(chǎn)生的脂肪顆粒數(shù)量增多。④通過逆轉(zhuǎn)錄PCR,發(fā)現(xiàn)PPAR-γ2的表達(dá)隨著PAEs濃度的增加而增加。
　　 ⑶研究表明：PAEs對(duì)脂肪細(xì)胞的影響表現(xiàn)為成熟脂肪細(xì)