超順磁氧化鐵標記骨髓間充質干細胞及其在移植治療糖尿病鼠中的示蹤作用研究.pdf

1、目的: 本實驗計劃嘗試應用超順磁氧化鐵(SPIO)標記技術，探討超順磁氧化鐵標記鼠骨髓間充質干細胞(BMSC)的方法以及對骨髓干細胞生物活性能力的影響，探討標記超順磁氧化鐵的骨髓間充質干細胞的體外磁共振(MR)成的情況，并通過注射鏈脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型，探討骨髓間充質干細胞對糖尿病的治療作用以及標記超順磁氧化鐵的骨髓問充質干細胞的體內成像的情況。 1、獲取Sprague dawley(SD)大鼠骨髓間充質

2、干細胞。 2、建立SD大鼠糖尿病模型。 3、將超順磁氧化鐵標記SD大鼠骨髓間充質干細胞，檢測標記后的SD大鼠骨髓間充質干細胞的生物活性情況。 4、將超順磁氧化鐵標記SD大鼠骨髓間充質干細胞進行磁共振掃描，獲取磁共振掃描數(shù)據(jù)。 5、將標記超順磁氧化鐵的SD大鼠骨髓間充質干細胞移植入SD大鼠糖尿病模型中，進行磁共振掃描獲取磁共振掃描數(shù)據(jù)，并觀測骨髓間充質干細胞對糖尿病的治療作用。 方法: 1、

3、通過貼壁法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質干細胞，并檢測其生物學活性。 2、通過注射鏈脲佐菌素建立SD大鼠糖尿病模型。 3、通過多聚賴氨酸和干細胞本來的吞噬能力將超順磁氧化鐵標記SD大鼠骨髓間充質干細胞。 4、通過磁共振掃描儀掃描標記超順磁氧化鐵的SD大鼠骨髓間充質干細胞，獲取其磁共振掃描的的數(shù)據(jù)和圖像。 5、通過測量SD大鼠的血糖和體重等情況，觀測大鼠骨髓間充質干細胞的治療作用。 結果: 1、

4、SD大鼠骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)：骨髓間充質干細胞接種后24-36小時開始貼壁。3天后可見細胞分裂增殖。1周左右見細胞增殖成集落，部分融合成單層。形態(tài)由原來的圈形轉變?yōu)槌衫w維細胞樣梭形。堿性磷酸酶(AKP)染色見細胞呈陽性。 2、骨髓間充質干細胞的體外標記觀察：超順磁氧化鐵和骨髓間充質干細胞堿性磷酸酶共育24小時后，顯微鏡下見細胞內有鐵顆粒，普魯士蘭染色后見標記率達80％以上。通過四甲基偶氮唑鹽比色(MTT法)實驗和臺盼藍負染

5、實驗，得出標記后的BMCS和未標記的細胞的生物活性無異。 3、磁共振掃描標記后骨髓間充質干細胞：T1加權像(T1W)，T2加權像(T2W)均見信號改變，其中T2w的改變更為明顯。 4、鏈脲佐菌素構建糖尿病鼠模型：腹腔注射鏈脲佐菌素，1周后出現(xiàn)模型鼠的血糖升高，4周后基本穩(wěn)定，并出現(xiàn)典型的糖尿病臨床表現(xiàn)。 5、骨髓間充質干細胞注入糖尿病鼠模型并磁共振掃描標記后BMSC:模型鼠的血糖在注射后有所降低，磁共振掃描下，未

6、見明確的信號改變。 結論: 1、貼壁法可以分離SD大鼠的骨髓間充質干細胞，獲得的細胞存活和增殖力能力較好。以1×106/ml的細胞濃度就是可以獲得較好的傳代。 2、超順磁氧化鐵可于體外標記骨髓間充質干細胞。22.4mmol/L的超順磁氧化鐵已經(jīng)可以在體外標記骨髓間充質干細胞，標記率大于80％。標記后的骨髓間充質干細胞，其內的超順磁氧化鐵可以停留在骨髓間充質干細胞長達8周，可以滿長期動態(tài)觀察的需要。標記后的骨髓間充

7、質干細胞，體外磁共振掃描中，對比度可以滿足觀察需要。 3、鏈脲佐菌素可以構建的大鼠糖尿病模型。50 mg/kg STZ腹腔注射可以建立類似Ⅰ型糖尿病的糖尿病模型。空腹血糖和最高血糖達16.7 mmol/L以上，并持續(xù)8周以上，而且可見相關并發(fā)癥出現(xiàn)。 4、超順磁氧化鐵未能在體內示綜骨髓間充質干細胞。體內超順磁氧化鐵未能示綜骨髓間充質干細胞在體內的遷移情況，其原因可能和超順磁氧化鐵在骨髓間充質干細胞中，隨受體體內鐵代謝和標