重癥急性胰腺炎相關(guān)性MiR-551b-5p對(duì)ICC細(xì)胞C-KIT基因的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.pdf

1、目的：
　　通過研究重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis SAP）相關(guān)性miR-551b-5p對(duì)ICC細(xì)胞C-KIT基因、鈣離子濃度的影響，來探討SAP相關(guān)性miR-551b-5p影響胃腸道動(dòng)力功能的機(jī)制。
　　方法：
　　1、Cajal間質(zhì)細(xì)胞（Interstitial cells of Cajal, ICC）的分離培養(yǎng)，從SD乳大鼠中獲取其小腸組織，顯微鏡下剝除小腸系膜、血管及小腸漿膜

2、層，進(jìn)一步剝除小腸黏膜及黏膜下層，在剩下的平滑肌層中獲取ICC細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2、根據(jù)研究目的將分離培養(yǎng)的ICC細(xì)胞分為5組：A組：正常對(duì)照組； B組：MiR-551b-5p過表達(dá)組（轉(zhuǎn)染MiR-551b-5p mimic）；C組:MiR-551b-5p mimic陰性對(duì)照組；D組：MiR-551b-5p下調(diào)表達(dá)組（轉(zhuǎn)染MiR-551b-5p inhibitor）； E組：MiR-551b-5p inhibitor陰性對(duì)

3、照組。
　　3、上調(diào)和下調(diào)ICC細(xì)胞中特異性MiR-551b-5p表達(dá)前后的檢測(cè)。
　　a、RT-PCR測(cè)定ICC細(xì)胞中MiR-551b-5p以及c-KIT mRNA的表達(dá)，并根據(jù)以上分組每組重復(fù)3次。
　　b、Western blotting檢測(cè)ICC細(xì)胞中c-KIT蛋白，每組重復(fù)3次。
　　c、激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)ICC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。以免疫熒光法檢測(cè)c-KIT表達(dá)，F(xiàn)luo-3AM法

4、檢測(cè)鈣離子濃度。
　　結(jié)果：
　　1、和正常對(duì)照組相比，miR-551b-5p mimic組 miR-551b-5p表達(dá)顯著升高（P<0.01）；miR-551b-5p inhibitor組 miR-551b-5p表達(dá)顯著降低（P<0.01）；miR-551b-5p mimic組和miR-551b-5p mimic陰性對(duì)照組相比，miR-551b-5p表達(dá)顯著升高（P<0.01）；miR-551b-5p inhibitor組

5、和miR-551b-5p inhibitor陰性對(duì)照組相比，miR-551b-5p表達(dá)顯著降低（P<0.01）。
　　2、和正常對(duì)照組相比，miR-551b-5p mimic組和 miR-551b-5p inhibitor組c-KIT表達(dá)無明顯差異(P>0.05）
　　3、和正常對(duì)照組相比，miR-551b-5p mimic組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度顯著升高（P<0.05）；miR-551b-5p inhibitor組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃