NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路和IL-6在SMMC-7721細胞對TNF-α的細胞毒性效應(yīng)耐受中的作用實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文NFκB信號轉(zhuǎn)導通路和IL6在SMMC7721細胞對TNFα的細胞毒性效應(yīng)耐受中的作用實驗研究姓名：楊季云申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：曾祥元2002.5.12用ELISA檢測TNFⅡ?qū)F—KB的活化作用；免疫組化檢測p65亞基的轉(zhuǎn)核。同時觀察NFKB信號通路活化對SMMC7721細胞凋亡和細胞周期的影響及加入活化阻斷劑TPCK后，對IL一6mRNA表達、IL6分泌、凋亡和細胞周期的影響。結(jié)果

2、：1未刺激的SMMC7721細胞可以少量表達IL。6，加入TNFa后能明顯地誘導IL6的表達增加；隨刺激時間的延長表達呈持續(xù)性增加，8小時達到高峰，12小時至24小時稍有降低，此后IL6表達一直維持在較高水平。SMMC772l細胞表達IL一6的量隨TNFa濃度的增加而增加。正常培養(yǎng)狀態(tài)下SMMC一7721細胞IL一6mRNA表達微弱；TNFa刺激后能明顯地誘導IL一6mRNA的表達，至6小時達到高峰，8小時IL6mRNA表達略有下降，然

3、后一直維持較高的水平。2外源加入的IL6對SMMC7721細胞生長起促進作用。加入抗IL6、抗IL6R抗體時，SMMC一7721細胞存活率明顯降低。SMMC772l細胞對TNFn的敏感性也顯著增加。IL6、抗IL6、抗IL一6R對TNFa誘導SMMC7721細胞凋亡沒有顯著影響。3ELISA檢測表明：10ng／mlTNF—Q刺激SMMC772l細胞30min，NFKB就發(fā)生顯著的轉(zhuǎn)核活化(P005)，2h活化達到高峰，然后開始回落，8h

4、已處于低水平的維持狀態(tài)。且NFKB的活化隨TNFn的劑量增加而增加。NFKB亞基p65免疫細胞化學顯示：正常培養(yǎng)條件下，胞漿中呈強陽性染色；TNFa刺激能誘導p65亞基轉(zhuǎn)核，在30分鐘時即可觀察到p65亞基明顯的核轉(zhuǎn)位，胞核、胞漿中均有陽性染色；l小時細胞核中染色呈強餌性，2小時核中染色達到高悔。胞漿染色已變得微弱。p65亞基昀核轉(zhuǎn)位也里TNFa劑量依賴關(guān)系。4應(yīng)用20lamol／LTPCK預(yù)處理SMMC7721細胞30min，加入10