2-甲氧基雌二醇通過GPER受體信號通路抑制人肺動脈平滑肌細胞增殖.pdf

1、目的：低氧、特殊藥物、異常的血流動力學狀態(tài)等因素均可以刺激肺動脈平滑肌細胞，使其表現(xiàn)出過度增殖的特性，進而引起肺血管重塑以及肺動脈高壓(pulmonary hypertension,PH)。雌激素代謝產物2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2ME)可以通過抑制肺血管炎癥及血管重塑，從而對肺動脈高壓產生保護性作用，然而其具體分子生物學機制尚不清楚。G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estroge

2、n receptor,GPER)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種雌激素膜型受體，可以介導雌激素在心血管系統(tǒng)疾病中的保護性作用，然而該受體在肺循環(huán)中的表達及意義不清楚。新近研究發(fā)現(xiàn)，2ME是GPER受體的一種高親和力激動劑。本研究以人肺動脈平滑肌細(human pulmonary artery smooth muscle cell,hPASMC)胞為研究對象，探討2ME對低氧條件下肺動脈平滑肌細胞增殖活性的影響及其與 GPER受體信號通路之間的關系。<

3、br>　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞：將購置的人肺動脈平滑肌細胞進行傳代培養(yǎng)，取第5-8代處于對數生長期的傳代細胞作為實驗細胞，隨機分為：A.常氧組、B.低氧組、C.低氧+2ME干預組、D.低氧+2ME+G15干預組。常氧組培養(yǎng)于37℃，充有5％CO2和95%空氣的培養(yǎng)箱內；各低氧組均培養(yǎng)于37℃，充有3%O2、5%CO2和92%N2的三氣培養(yǎng)箱內；2ME干預組培養(yǎng)基中2ME濃度為0.2μM；G15干預組培養(yǎng)基中加

4、入GPER受體拮抗劑G15濃度為0.01μM，均孵育48h。
　　2.通過MTT試驗比較各組實驗細胞給予干預后48h細胞生長情況。
　　3.通過 RT-PCR技術檢測各實驗組細胞中增質細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)及GPER受體mRNA轉錄水平。
　　4.通過Western blot技術檢測各實驗組細胞中PCNA和GPER受體蛋白表達水平。
　　結果：

5、
　　1.成功獲得hPASMC傳代培養(yǎng)細胞。
　　2.實驗細胞條件干預48h后，MTT實驗結果提示低氧組OD值高于其他各組；常氧組與低氧+2ME+G15組之間 OD值無統(tǒng)計學差異；低氧+2ME組OD值最低。
　　3.實驗細胞條件干預48h后， RT-PCR結果顯示低氧組和低氧+2ME+G15組PCNA基因mRNA轉錄水平無統(tǒng)計學差異，但較其他兩組顯著升高；低氧+2ME組與常氧組間PCNA轉錄水平無統(tǒng)計學差異。常氧組GP

6、ER基因mRNA轉錄水平顯著高于其他各組，低氧+2ME組和低氧+2ME+G15組GPER轉錄水平無統(tǒng)計學差異，但均高于低氧組。
　　4.實驗細胞條件干預48h后，Western blot結果顯示常氧組細胞PCNA蛋白水平顯著低于其他三組；低氧組和低氧+2ME+G15組 PCNA蛋白水平無統(tǒng)計學差異；低氧+2ME組PCNA蛋白水平顯著高于常氧組，但低于其他兩個低氧處理組。常氧組GPER受體蛋白表達水平高于其他各組；低氧組和低氧+2M