大鼠不同階段生精細胞的差異表達基因的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、分離得到單一的生精細胞群并建立單一細胞類型的cDNA文庫,就可以特異性地研究單一細胞的基因表達和有效地篩選不同生精細胞群之間差異表達的基因.激光捕獲顯微切割技術（Laser Capture Microdissection,LCM）帶來了細胞分離技術的革命,它能夠快速、高效和精確地從復雜組織環(huán)境中捕獲分離單一細胞.該研究小組已經成功地利用其捕獲和分離了大鼠初級鼠母細胞和圓形精子細胞.該實驗在此基礎上從分離的兩種細胞中提取RNA,合成雙鏈

2、cDNA,并進一步通過抑制性消減雜交（Suppressive Subtractive Hybridization,SSH）方法構建了大鼠初級精母細胞（RSA）和圓形精子細胞（RSB）的雙向cDNA消減文庫.根據SSH的結果,選擇918個PCR純化產物（603個初級精母細胞差異表達,315個圓形精子細胞差異表達）進行斑點雜交（Dot Blotting）分析,以驗證差異表達并分析其表達差異的強度.利用公共數據庫,對圓形精子細胞差異表達的02

3、-66克隆進行電子克隆,使用拼接引物PCR擴增出cDNA并測序.測序全長為564bp,編碼179個氨基酸,其核苷酸序列和GenBank中7個功能未知的序列高度同源.其編碼蛋白結構分析顯示其部分氨基酸序列和AhpC-TSA和Piwi有較高的結構相似性.AhpC/TSA家族具有廣泛的細胞內還原活性.Piwi基因編碼一種核質蛋白,能夠通過體細胞信號傳導和細胞自主調節(jié)雙重機制控制原始生殖細胞（germ-line stem cells,GSCs）

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