中國(guó)鹵蟲caveolin-1基因的克隆及功能的初步研究.pdf

1、窖蛋白是細(xì)胞膜上特殊內(nèi)陷結(jié)構(gòu)胞膜窖的標(biāo)志性蛋白,其主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。窖蛋白-1(Caveolin-1)是構(gòu)成胞膜窖的主要組成成分。其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的腳手架區(qū)的氨基酸序列高度保守,可以募集內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子,內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶,G-蛋白,活化的Src家族蛋白激酶和蛋白激酶C等信號(hào)分子,并導(dǎo)致下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)被抑制或者激活。
　　 鹵蟲(Artemia)隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門,甲殼綱,鰓足亞綱,無甲目,鹵蟲屬,是一種生活在高鹽海水或

2、內(nèi)陸鹽湖,適應(yīng)性極強(qiáng)的小型甲殼動(dòng)物。鹵蟲以卵胎生的生殖方式繁殖,但在環(huán)境脅迫的極端環(huán)境下也通過卵生的方式產(chǎn)生休眠卵或稱滯育卵。也正因?yàn)槿绱?休眠胚胎滯育的打破和胚胎發(fā)育的過程已成為發(fā)育生物的研究熱點(diǎn)。
　　 本文采用RACE技術(shù)擴(kuò)增了中國(guó)鹵蟲(Artemia sinica)caveolin-1基因的全長(zhǎng)序列,并對(duì)得到的序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。用Real-time實(shí)時(shí)定量PCR定量分析各發(fā)育時(shí)期和不同環(huán)境壓力條件下caveoli

3、n—1表達(dá)量的變化,進(jìn)而分析鹵蟲caveolin-1基因的功能。結(jié)果如下:
　　 (1)通過實(shí)驗(yàn),我們得到長(zhǎng)974bp的鹵蟲caveolin-1基因的全長(zhǎng)序列,完整開放閱讀框大小為672bp。
　　 (2)經(jīng)生物信息學(xué)分析,ORF區(qū)編碼了一個(gè)含224個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),預(yù)測(cè)分子量為25.4KDa,理論等電點(diǎn)為5.48。
　　 (3)鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期,不同鹽度和菌刺激對(duì)鹵蟲的脅迫實(shí)驗(yàn)顯示,在0小時(shí),caveo