通過UV-X角膜交聯機對兔眼角膜交聯的實驗研究探討角膜交聯術對酶消化的抑制作用.pdf

1、第一部分UV-X角膜交聯機對兔眼角膜交聯效果的實驗研究
　　目的：應用UV-X角膜交聯機對兔眼角膜進行角膜交聯及相關實驗研究，驗證該儀器的作用效果并作出評價，為下一步實驗打下基礎。
　　方法：10只（20眼）日本大耳白兔，1只為正常對照組，9只隨機取一眼為實驗組，另一眼為對照組，雙眼均刮去角膜上皮，實驗組去上皮后用UV-X角膜交聯機行交聯術；術后1天、3天、7天各取3只兔子處死，取雙眼角膜，并對取下的角膜組織作光鏡（HE染色

2、、VG染色）及電鏡觀察。
　　結果：實驗組每只眼睛都順利完成角膜交聯術。HE染色示交聯后角膜均有水腫、炎性反應，但隨著時間增長程度逐漸減輕，至術后第7天，角膜無明顯水腫、炎性反應亦明顯減輕。對照組炎癥及水腫情況均較實驗組輕，但其恢復較實驗組慢。VG染色按照灰度差異將膠原纖維進行定量分析示，實驗組膠原纖維的密度明顯高于對照組，且經過交聯的角膜靠近上皮層的纖維密度更高。電鏡示實驗組術后角膜細胞稍腫脹，細胞間連接較緊密，纖維排列較整齊，

3、對照組細胞腫脹，內容物除個別內質網可見外其余溶解，細胞核增大，密度降低，膠原纖維間距增加。
　　結論：應用UV-X角膜交聯機進行角膜交聯術穩(wěn)定、安全、有效。經過該儀器交聯過的角膜較未交聯過的角膜更厚，纖維排列更整齊、密集。
　　第二部分角膜交聯術對酶消化抑制作用的實驗研究
　　目的：對比觀察三種蛋白酶（胃蛋白酶、胰蛋白酶和膠原蛋白酶）對交聯和未交聯的兔眼角膜進行消化，驗證角膜交聯術對酶消化的抑制作用。
　　方法：

4、9只（18眼）日本大耳白兔，隨機分為3組（每組3只），隨機取一眼為實驗組，另一眼為對照組，實驗組行角膜交聯術，對照眼僅刮去角膜上皮，之后立即將兔子處死并取雙眼角膜，分別將取好的角膜放入配好的酶溶液中，并置于酶的最適溫度，觀察并記錄消化過程角膜的形態(tài)變化及角膜被完全消化所用的時間。根據上一步實驗情況再取18只（36眼）日本大耳白兔，每組6只（12眼），分別在消化的第1、3、7天隨機各取出2只兔子剩余的角膜組織并作光鏡觀察（HE染色）。

5、r>　　結果：角膜完全消化的時間為：胃蛋白酶實驗組分別為66天、65天、59天，平均63.33±2.19天，對照組分別為61天、59天、52天，平均57.33±2.73天，實驗組明顯長于對照組（P<0.05）；胰蛋白酶實驗組分別為4天、4天、4天，平均4.00天；對照組分別為3天、3天、2天，平均為2.67±0.33天，實驗組明顯長于對照組（P<0.05）；膠原蛋白酶實驗組分別為7天、3天、5天，平均5±1.15天；對照組分別為2天、2