多克隆及單克隆P24抗體在石蠟組織切片上檢測(cè)BDV-P24蛋白質(zhì)的應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究目的:
　　驗(yàn)證本課題組前期制備的多克隆及單克隆P24抗體能否在石蠟組織切片上檢測(cè)博爾納病病毒(Borna disease virus，BDV)磷蛋白(P24蛋白質(zhì))以及探索其運(yùn)用的條件。
　　研究方法:
　　選擇出生24h內(nèi)的SD大鼠20只為實(shí)驗(yàn)組顱內(nèi)注射BDV病毒液，對(duì)照組大鼠20只在相同部位注射磷酸鹽緩沖液(Phosphate BufferedSaline，PBS)，未經(jīng)注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作為

2、陰性實(shí)驗(yàn)對(duì)照，飼養(yǎng)到60天取腦石蠟包埋制片;免疫組化染色用Envision兩步法，一抗為多克隆或單克隆P24抗體，以PBS代替一抗作為空白對(duì)照，P24抗體的稀釋濃度分別從1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、直到1∶5000;以高倍鏡下神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性，將每張切片陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分乘以陽(yáng)性強(qiáng)度評(píng)分計(jì)算總分。
　　結(jié)果:
　　多克隆P24和單克隆P24抗體分別在BDV感染大鼠實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的染

3、色評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（多克隆抗體Z=-3.108，P=0.000，而單克隆抗體Z=-4.605，p=0.000）;在多克隆P24抗體稀釋度中，1∶200、1∶400的敏感性好而背景著色較輕，在單克隆P24抗體稀釋度中，1∶100、1∶200、1∶400的敏感性好而無(wú)背景著色。
　　結(jié)論:
　　多克隆及單克隆P24抗體在石蠟組織切片上能檢測(cè)出BDV P24蛋白質(zhì);并且多克隆P24抗體推薦的濃度為1∶200和1∶400，單克隆

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