血管周圍脂肪組織在尼古丁誘導血管內皮細胞炎癥反應中的作用.pdf

1、目的:吸煙是動脈粥樣硬化最重要的危險因素之一，煙霧中的尼古丁(Nicotine)被認為是引起心血管損害的主要物質之一。以往研究主要集中在吸煙通過直接損傷血管內皮從而引發(fā)動脈粥樣硬化，近年來，多項研究證實血管周圍脂肪組織(Perivascular adipose tissue，PVAT)可分泌多種細胞因子，參與PVAT與血管之間的內環(huán)境調節(jié)作用。因此我們提出假設:尼古丁刺激后的血管損傷除了尼古丁對血管內皮的直接損傷外，可能還存在通過尼古丁

2、的刺激后PVAT內分泌及旁分泌功能改變，造成細胞因子和炎癥因子的分泌異常，進而影響血管壁本身的結構與功能，最終促進內膜損傷。因此，我們設計了本課題來研究尼古丁刺激條件下體外培養(yǎng)的血管周圍脂肪細胞的脂肪因子及炎性因子水平的變化，證實上述改變對血管內皮細胞炎癥反應的影響
　　方法:首先單獨培養(yǎng)脂肪細胞，將尼古丁稀釋成終濃度為10-6mol/l、10-7 mol/l、10-8 mol/l。分別用上述三個濃度的尼古丁處理脂肪細胞24小時后

3、提取上清，用ELISA檢測IL-1β，IL-6，TNF-α和脂聯(lián)素的分泌量。利用同樣濃度的尼古丁處理內皮細胞24小時后提取上清，用ELISA檢測IL-1β，IL-6，TNF-α的分泌量。最后利用transwell培養(yǎng)板構建脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)體系后，用10-6 mol/l濃度的尼古丁處理脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)體系。Western-blot方法檢測NF-kB-p65的磷酸化水平，粘附因子VCAM-1、ICAM-1表達水平，再給予NF

4、-kB抑制劑PDTC預處理共培養(yǎng)體系1小時后ELISA檢測共培養(yǎng)體系中IL-1β，IL-6，TNF-α和脂聯(lián)素的分泌量，Western-blot方法檢測粘附因子VCAM-1，ICAM-1表達水平。
　　結果:尼古丁單獨刺激脂肪細胞后，脂聯(lián)素的表達量隨尼古丁濃度的增加顯著降低(P＜0.05)，IL-1β和IL-6的表達量在尼古丁濃度為10-6、10-7mol/l時顯著增加(P＜0.01)，10-8 mol/l濃度時，表達量相對于對照

5、組無變化(P＞0.05)。尼古丁濃度為10-7、10-8 mol/l時，TNF-α的表達量相對于對照組無變化(P＞0.05)，10-6mol/l時，表達量相對于對照組有顯著增加(P＜0.01)。尼古丁單獨刺激內皮細胞后，IL-1β和IL-6的表達量隨著尼古丁濃度的增加而增加(P＜0.05)。而TNF-α的表達在各尼古丁處理組間無變化(P＞0.05)。尼古丁刺激脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)后，IL-1β和IL-6的表達量相對于單獨培養(yǎng)組有

6、顯著上升(P＜0.05)、TNF-α的表達量相對于單獨培養(yǎng)脂肪組和內皮組其表達量也有顯著上升。(P＜0.05)、脂聯(lián)素的表達量相對于單獨培養(yǎng)脂肪細胞組分泌量進一步下降，且具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Western blot結果顯示脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)組的NF-kB p65的表達高于單獨培養(yǎng)脂肪細胞組和單獨培養(yǎng)內皮細胞組(P＜0.01)，脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)組的VCAM-1、ICAM-1表達高于單獨培養(yǎng)內皮細胞組(P＜0.01

7、)。NF-kB抑制劑PDTC(100um)預處理脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)體系1小時后，脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)IL-1β、IL-6和TNF-α的表達量相對于對照組有顯著上升(P＜0.05)，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組IL-1β、IL-6和TNF-α的表達量相對于共培養(yǎng)組有明顯下降趨勢(P＜0.05)。脂聯(lián)素的表達量，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組相對于共培養(yǎng)組其表達量有顯著上升(P＜0.05)，且具有統(tǒng)計學意義。Western blot結果顯示

8、經尼古丁刺激后，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組相對于共培養(yǎng)組VCAM-1、ICAM-1表達量顯著降低。(P＜0.01)。
　　結論:尼古丁的刺激可改變PVAT內分泌及旁分泌功能改變，造成細胞因子和炎癥因子脂聯(lián)素、 IL-1β、IL-6和TNF-α的異常分泌，進而加劇內皮細胞炎癥反應，最終導致內膜功能障礙。
　　尼古丁能激活炎癥信號分子NF-kB來促進脂肪細胞-內皮細胞共培養(yǎng)體系促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的異常分泌、粘附