棕色棉遺傳轉化體系的建立及GhANR功能初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以新疆自育棕色棉品種新彩棉5號和新彩棉13號為受體材料，采用農桿菌介導莖尖轉化法和基因槍轟擊莖尖法，建立了棕色棉莖尖農桿菌介導遺傳轉化技術體系和莖尖基因槍遺傳轉化技術體系。采用以上兩種轉化方法，成功將GhANR基因導入到棕色棉品種中，經(jīng)卡那霉素抗性莖尖篩選、抗性芽誘導生根、PCR和qPCR分子檢測，獲得了新彩棉5號和13號陽性轉基因植株，并得到了T2代轉基因種子，為新疆棕色棉遺傳轉化體系的建立奠定了基礎。主要研究結果如下：1.棕色

2、棉農桿菌介導莖尖遺傳轉化體系的建立
　　農桿菌介導莖尖遺傳轉化的最佳轉化條件是：暗培養(yǎng)4d、光照培養(yǎng)2d的無菌苗莖尖，農桿菌菌液 OD600值為0.6～0.8之間，侵染時間10min，共培養(yǎng)48h，然后在 MSB+8g·L－1瓊脂+100/125mg·L－1卡那霉素篩選培養(yǎng)基中篩選25d，再將抗性芽轉繼于1/2MS+1g·L-1活性炭的生根培養(yǎng)基中誘導抗性芽生根，獲得抗性再生植株。通過PCR檢測，1250個新彩棉5號莖尖獲得5株陽

3、性轉基因植株，轉化率為0.4％，1200個新彩棉13號莖尖獲得3株陽性轉基因植株，轉化率為0.25%。
　　2.棕色棉莖尖基因槍遺傳轉化體系的建立
　　最佳的莖尖基因槍遺傳轉化體系為：暗培養(yǎng)4d，光照培養(yǎng)1d的無菌苗莖尖，前滲處理4h；金粉微載體直徑為1μm，質粒濃度為1.0μg·μL－1，轟擊壓力為7.586MPa（1100 psi），轟擊距離為9cm，真空度為0.0946MPa(28 inch Hg)時進行轟擊轉化，轟擊

4、后恢復培養(yǎng)4d。然后在MSB+8g·L－1瓊脂+125mg·L－1卡那霉素篩選培養(yǎng)基中篩選25d。獲得抗性芽后，在1/2MS+1g·L-1活性炭的生根培養(yǎng)基中誘導抗性芽生根，獲得抗性再生植株。通過PCR檢測，5200個新彩棉5號莖尖共獲得16株陽性轉基因植株，轉化率為0.31%。
　　3. GhANR基因的功能初步分析
　　利用農桿菌介導莖尖轉化法和基因槍轟擊法獲得新彩棉5號轉基因株系12個和新彩棉13號轉基因株系2個。qP

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