封閉CD158受體表位對供者NK細(xì)胞殺傷受者成熟DC細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：
　　就目前來說，異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantaion，allo-HSCT)依然是治愈某些惡性血液病最有效的一種手段。但是，移植物抗宿主病（graft-versus-host disease，GVHD）是移植后最為嚴(yán)重的并發(fā)癥。殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（killer cell immunoglobulin-like receptors，KIR

2、）在allo-HSCT的免疫中發(fā)揮重要作用。受者體內(nèi)缺乏供者抑制型 KIR的相應(yīng)配體，可致供者自然殺傷（natural killer cell,NKs）細(xì)胞產(chǎn)生異源反應(yīng)性，殺傷受者樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）減低 GVHD的發(fā)生率。目前，在體外通過封閉抑制型受體活化供者NK細(xì)胞，對受者DC細(xì)胞進(jìn)行殺傷，并將供者KIR基因型表達(dá)情況與臨床單倍體 allo-HSCT預(yù)后相結(jié)合，探討供者 KIR與受者 HLA模式，為 HS

3、CT選擇最佳供者的研究并不多。
　　本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分：一部分在體外利用抗CD158a及CD158b的單克隆抗體對供者NK細(xì)胞表面抑制型受體KIR2DL1及KIR2DL2/L3進(jìn)行封閉，研究供者NK細(xì)胞對受者DC的殺傷作用;另一部分回顧分析了接受單倍體allo-HSCT的急性白血病患者一般資料，探討KIR/HLA受配體模式對單倍型HSCT預(yù)后的影響，為在臨床找尋最佳移植供者以及聯(lián)合NK細(xì)胞過繼輸注改善HSCT預(yù)后提供參考。

4、　　第一部分體外修飾供者NK細(xì)胞殺傷受者DC減輕GVHD的作用研究
　　方法：
　　選取2010年5月至2014年12月行單倍體allo-HSCT的5例急性白血病患者及相應(yīng)供者分別作為研究對象。采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(即 PCR-SSP)法，對5對供/受者移植前檢測KIR和HLA分型，分別采集供受者外周血單個(gè)核細(xì)胞，使用 NK細(xì)胞分選試劑盒對供者 NK細(xì)胞進(jìn)行富集，并以其作為效應(yīng)細(xì)胞，而取受者DC作為實(shí)驗(yàn)靶細(xì)胞，利用

5、抗CD158單抗分別對供者表面KIR抑制型受體進(jìn)行封閉，并采用CCK-8比色法分別比較抑制性KIR封閉前后的NK細(xì)胞對DC的殺傷作用。
　　結(jié)果：
　　同一效靶比（10∶1）下，供者NK細(xì)胞表面抑制性受體封閉后，對受者DC的殺傷活性明顯升高，通過調(diào)整封閉抗體高濃度可提高其殺傷活性，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。單一封閉 KIR2DL2/L3受體表位，在同一效靶比（10∶1）下，供受者 KIR2DL1/C1組對靶細(xì)胞殺

6、傷效果高于受者為 C2及 C1/C2組，用不同濃度的CD158a單抗進(jìn)行封閉，隨封閉抗體濃度的增加，殺傷效果增強(qiáng)。
　　第二部分單倍型異基因造血干細(xì)胞移植治療急性白血病療效觀察
　　方法：
　　回顧整理5例之前接受單倍體 allo-HSCT的患者資料，移植前均使用改良白消安/環(huán)磷酰胺(Bu/Cy)+抗人胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)進(jìn)行預(yù)處理。
　　結(jié)果：
　　5例受者均成功完成供者干細(xì)胞的持久植入。中性粒細(xì)胞（

7、需連續(xù)3d）計(jì)數(shù)≥0.5×109/L的中位時(shí)間是13d，血小板（不輸并且連續(xù)7d）計(jì)數(shù)≥20×l09/L的中位時(shí)間是18d。表達(dá) KIR2DL1、KIR2DL2/3且 KIR2DS1陽性供者對 C2/C2組受者在移植后造血重建較快、急慢性GVHD發(fā)生率較低、移植后感染情況較輕。
　　結(jié)論：
　　利用抗CD158單抗封閉供者NK細(xì)胞表面抑制型受體KIR2DL1及KIR2DL2/L3可以提高供者來源 NK細(xì)胞對受者 DC的殺傷活