Tregs在日本血吸蟲感染小鼠DCs抑制過敏性哮喘中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過過繼轉(zhuǎn)移日本血吸蟲感染小鼠DCs，探討蠕蟲感染DCs是否通過誘導(dǎo)Tregs產(chǎn)生來抑制過敏性哮喘的發(fā)生進(jìn)展。
　　 方法：用CD11c+磁珠分離純化日本血吸蟲感染鼠及正常鼠CD11c+DCs，分別標(biāo)記為SJDCs和NDCs。部分SJDCs和NDCs用含0.1 mg/ml OVA的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)72h，用ELISA試劑盒檢測上清液中IL-12和IL-10分泌水平。部分SJDCs和NDCs用于過繼轉(zhuǎn)移：將15只BALB/c小

2、鼠，隨機(jī)分為3組，A組為過繼轉(zhuǎn)移SJDCs并誘發(fā)過敏性哮喘組，B組為過繼轉(zhuǎn)移NDCs并誘發(fā)過敏性哮喘組，C組為單純過敏性哮喘組。A、B兩組小鼠經(jīng)尾靜脈過繼轉(zhuǎn)移1×106DCs，2小時(shí)后A、B、C三組均開始誘發(fā)哮喘。4周后，處死小鼠，收集脾臟單個(gè)核細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(F0xp3+Tregs)、CD4+CD25+IL-10+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(IL-10+Tregs)以及CD4+T細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子I

3、L-4、IL-5、IFN-γ表達(dá)情況；收集小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)；取小鼠肺組織作病理切片及免疫組化染色，觀察肺組織炎癥變化和CCL-11表達(dá)。
　　 結(jié)果：SJDCs和NDCs培養(yǎng)上清液中IL-10分泌水平分別為(64.80±3.6050)ng/ml、(43.45±0.7720)ng/ml；IL-12分泌水平分別為(5.88±0.0429)ng/ml、(5.91±0.0330)ng/ml，和NDCs

4、相比，SJDCs IL-10分泌水平顯著提高(P<0.001)，但兩者IL-12分泌水平無顯著性差異(P>0.05)。A、B、C三組小鼠Foxp3+Tregs占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為(8.44±0.3209)％、(4.34±0.6465)％、(3.62±1.2834)％；IL-10+Tregs占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為(4.86±0.8112)％、(2.80±0.6205)％、(2.30±0.9138)％；IL-4+CD4+T

5、細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為(3.54±0.8444)％、(5.68±0.7328)％、(5.96±1.992)％；IL-5+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為(4.20±0.6745)％、(6.70±0.6285)％、(6.82±1.9955)％；IFN-γ+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比分別為(7.82±0.9550)％、(7.06±2.1733)％、(7.98±3.9392)％，與B、C組比較，A組Foxp

6、3+Tregs、IL-10+Tregs水平顯著增高(P<0.01，P<0.001)，CD4+T細(xì)胞內(nèi)IL-4、IL-5水平顯著降低(P<0.01)，三組CD4+T細(xì)胞內(nèi)IFN-γ水平無顯著性變化(P>0.05)。A、B、C三組小鼠BALF中嗜酸性粒細(xì)胞的總數(shù)目(104)分別為6.083±1.4043、26.100±4.7647、35.733±7.3730，A組和B、C組之間比較，A組嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目顯著降低(P<0.05)。A、B、C三

7、組小鼠肺組織免疫組化染色顯示，CCL-11在小鼠肺組織中血管、氣管內(nèi)的陽性區(qū)域面積占血管、氣管總面積的百分比分別為0.2737±0.0218、0.4818±0.0199、0.5339±0.0322；CCL-11在小鼠肺組織中陽性區(qū)域平均光密度值分別為0.2546±0.0172、0.3160±0.0235、0.3874±0.0236，與B、C組比較，A組CCL-11在小鼠肺組織中血管、氣管內(nèi)的陽性區(qū)域面積占血管、氣管總面積的百分比及陽性區(qū)