ACE-ACE2在休克腸淋巴液介導腎臟損傷中的作用.pdf

1、外傷、術中大出血等導致的失血性休克是臨床上常見的急危重癥，失血性休克后引起的急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)是常見的并發(fā)癥之一，已有研究表明，失血性休克后腸淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph，PHSML)回流在失血性休克后腎臟損傷的發(fā)病過程中具有重要作用，阻斷PHSML回流可減輕腎臟損傷，其機制與減輕腎臟炎癥反應、氧化應激等因素有關。
　　腎素-血管緊

2、張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)是人體中重要的內分泌系統(tǒng)之一，RAS包含兩條關鍵軸:血管緊張素轉化酶（angiotensin-converting enzyme，ACE）-血管緊張素(angiotensin，Ang)Ⅱ-AngⅡ1型受體(AngⅡ1receptor，AT1R)和ACE2-Ang(1-7)-Mas相關G蛋白偶聯(lián)受體(Mas-related G-protein-coupled recept

3、or，MasR)，研究表明，失血性休克后腎組織ACE/ACE2表達失衡，以腸淋巴液引流減少PHSML回流的干預措施可改善腎組織ACE/ACE2的失衡，說明ACE/ACE2失衡參與了PHSML介導的腎損傷，但其機制還待進一步研究。本實驗以雄性C57小鼠為研究對象，利用RAS兩條軸的工具藥或ACE2-/-小鼠，調節(jié)ACE/ACE2平衡，探討ACE/ACE2平衡在PHSML介導腎臟損傷中的作用。
　　首先，將18只C57雄性小鼠隨機均分

4、為3組:Sham、Shock和Shock+Ligation組，Shock和Shock+Ligation組小鼠麻醉后打開腹腔，分離腸淋巴管，在腸淋巴管下穿線，不結扎，分離兩側股動脈，左側股動脈插管后連接生物信號采集系統(tǒng)監(jiān)測小鼠血壓，右側股動脈插管后連接推注機，用于放血和復蘇，術后穩(wěn)定30min后開始放血，10min內將血壓降至40mmHg，維持40±2mmHg1h后，將抽出的血與林格液按體積比1∶1混勻進行液體復蘇，復蘇完畢后Shock+

5、Ligation組小鼠結扎腸淋巴管，Shan組和Shock組不結扎。同時取18只C57雄性小鼠，建立失血性休克模型，在液體復蘇的同時，分別給予依那普利（Enalapril，10mg/kg）、氯沙坦(Losartan，50mg/kg)和Ang(1-7)(1×10-7mol/kg)，復蘇完畢后不結扎腸淋巴管，分別作為Shock+Enalapril、Shock+Losartan、Shock+Ang(1-7)組，每組6只;取C57雄性小鼠12只

6、，復制失血性休克模型，在復蘇的同時，分別給予MasR抑制劑A-779(0.1mg/kg)和AngⅡ（1×10-7mol/kg），復蘇完畢后結扎腸淋巴管，即為Shock+Ligation+A779組和Shock+Ligation+AngⅡ組，每組6只;取6只ACE2基因敲除(ACE2-/-)小鼠，復制失血性休克模型，復蘇完畢后結扎腸淋巴管，即為Shock+Ligation+ACE-/-組。所有小鼠完成上述手術后，在液體復蘇結束后4h或相應

7、時間點，留取小鼠腎臟和血漿。HE染色后，觀察腎臟組織形態(tài)學變化;ELISA方法檢測腎組織、血漿AngⅡ和Ang(1-7)含量;免疫組織化學染色方法觀察腎組織ACE、ACE2、AT1R、MasR的表達。
　　結果發(fā)現(xiàn)，Sham組小鼠腎組織結構基本正常，Shock組小鼠腎臟出現(xiàn)了明顯的組織損傷，腸淋巴管結扎以及Enalapril、Losartan、Ang(1-7)治療減輕了休克小鼠的腎臟組織學損傷，ACE2-/-、AngⅡ、A-779

8、加重了Shock+Ligation組小鼠腎臟組織學損傷程度。Shock組腎組織ACE、AT1R表達與AngⅡ含量較Sham組明顯升高，Shock+Enalapril、Shock+Ang(1-7)、Shock+Losartan、Shock+Ligation組與Shock組相比，腎組織ACE、AT1R表達與AngⅡ含量明顯降低;Shock+Ligation+AngⅡ組腎組織AngⅡ含量較Shock+Ligation組升高，Shock+Lig

9、ation+ACE2-/-與Shock+Ligation+A-779組腎組織中AngⅡ與Shock+Ligation組無統(tǒng)計學差異。Shock組血漿AngⅡ含量較Sham組顯著升高;Shock+Enalapril和Shock+Ang(1-7)組血漿AngⅡ含量較Shock組明顯減少;Shock+Ligation+AngⅡ組血漿AngⅡ水平較Shock+Ligation組明顯升高。Shock組腎組織ACE2、MasR表達、Ang(1-7)

10、水平較Sham組明顯降低;Shock+Ang(1-7)和Shock+Ligation組腎組織ACE2、MasR表達與Ang(1-7)含量較Shock組明顯升高，Shock+Enalapril、Shock+Losartan組腎組織ACE2、MasR表達與Ang(1-7)水平與Shock無統(tǒng)計學差異;Shock+Ligation+ACE2-/-組腎臟ACE2表達、Ang(1-7)含量較Shock+Ligation組明顯降低，Shock+Li

11、gation+AngⅡ組腎組織MasR表達較Shock+Ligation組明顯降低，Shock+Ligation+A-779組腎臟ACE2、MasR表達與Ang(1-7)含量較Shock+Ligation組明顯降低。Shock組血漿Ang(1-7)較Sham組明顯降低，Shock+Enalapril組、Shock+Ang(1-7)組、Shock+Losartan組和Shock+Ligation組血漿Ang(1-7)含量較Shock組明顯

12、升高;Shock+Ligation+ACE2-/-、Shock+Ligation+AngⅡ和Shock+Ligation+A-779組血漿Ang(1-7)水平較Shock+Ligation組明顯降低。
　　上述研究結果表明，休克腸淋巴液介導腎損傷的機制與ACE-AngⅡ-AT1R高表達、ACE2-Ang(1-7)-Mas1R低表達有關，ACE/ACE2失衡參與了休克腸淋巴液介導的腎損傷;以RAS為切入點，可以調節(jié)失血性休克后的急性