Snail在腎小管上皮間質轉化過程中的表達及意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:從組織和細胞水平上探討Snail的表達與腎小管上皮間質轉化(EMT)及腎間質纖維化(TIF)中的關系;觀察轉染Snail基因后人腎小管上皮細胞(HK-2) miRNA表達譜的變化。
  方法:(1)采用HE、PAS、PASM、Masson染色評估40例IgA腎病患者腎穿組織腎小管間質病理變化,根據(jù)腎小管萎縮及間質纖維化程度分為輕度、中度、重度三組,選取4例正常腎臟組織作為對照,采用免疫組化方法檢測Snail及EMT相關蛋白V

2、imentin、SMA、E-cadherin的表達。(2)構建過表達Snail的質粒,采用陽性脂質體LipofectamineTM2000轉染HK-2細胞,24 h后倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。(3)將體外培養(yǎng)的HK-2細胞分為正常對照組、空轉染組、Snail基因轉染組。實時熒光定量(qPCR)檢測Snail基因的表達,RT-PCR及Western blot方法檢測Snail、Vimentin、SMA、E-cadherin蛋白和基因在

3、HK-2細胞中的表達。進一步借助基因芯片篩選出差異表達的miRNAs。
  結果:(1)免疫組化結果顯示,Snail、Vimentin及SMA在IgA腎病組織中高表達,E-cadherin在IgA腎病組織中低表達;IgA腎病組織中Snail與Vimentin及SMA蛋白的表達呈正相關,與E-cadherin蛋白的表達呈負相關;且TIF程度越高,Snail蛋白表達越高。(2)經(jīng)測序驗證本實驗成功構建出過表達Snail的質粒,轉染24

4、 h后借助倒置顯微鏡觀察,空白對照組及空轉染組HK-2細胞形態(tài)呈鋪路石樣,Snail基因轉染組中HK-2細胞形態(tài)呈紡錘形,間隙增寬,兩者形態(tài)上差別明顯。(3)qPCR結果顯示,Snail轉染組中Snail mRNA的相對表達量明顯高于空白對照組及空轉染組,差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0.01)。RT-PCR及Western blot檢測結果顯示,與對照組相比,Snail轉染組Snail、Vimentin、SMA在基因和蛋白水平表達均升高,E-

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