Snail在腎小管上皮間質轉化過程中的表達及意義.pdf

1、目的：從組織和細胞水平上探討Snail的表達與腎小管上皮間質轉化（EMT）及腎間質纖維化（TIF）中的關系；觀察轉染Snail基因后人腎小管上皮細胞（HK-2） miRNA表達譜的變化。
　　方法：（1）采用HE、PAS、PASM、Masson染色評估40例IgA腎病患者腎穿組織腎小管間質病理變化，根據(jù)腎小管萎縮及間質纖維化程度分為輕度、中度、重度三組，選取4例正常腎臟組織作為對照，采用免疫組化方法檢測Snail及EMT相關蛋白V

2、imentin、SMA、E-cadherin的表達。（2）構建過表達Snail的質粒，采用陽性脂質體LipofectamineTM2000轉染HK-2細胞，24 h后倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。（3）將體外培養(yǎng)的HK-2細胞分為正常對照組、空轉染組、Snail基因轉染組。實時熒光定量（qPCR）檢測Snail基因的表達，RT-PCR及Western blot方法檢測Snail、Vimentin、SMA、E-cadherin蛋白和基因在

3、HK-2細胞中的表達。進一步借助基因芯片篩選出差異表達的miRNAs。
　　結果：（1）免疫組化結果顯示，Snail、Vimentin及SMA在IgA腎病組織中高表達，E-cadherin在IgA腎病組織中低表達；IgA腎病組織中Snail與Vimentin及SMA蛋白的表達呈正相關，與E-cadherin蛋白的表達呈負相關；且TIF程度越高，Snail蛋白表達越高。（2）經(jīng)測序驗證本實驗成功構建出過表達Snail的質粒，轉染24

4、 h后借助倒置顯微鏡觀察，空白對照組及空轉染組HK-2細胞形態(tài)呈鋪路石樣，Snail基因轉染組中HK-2細胞形態(tài)呈紡錘形，間隙增寬，兩者形態(tài)上差別明顯。（3）qPCR結果顯示，Snail轉染組中Snail mRNA的相對表達量明顯高于空白對照組及空轉染組，差異有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）。RT-PCR及Western blot檢測結果顯示，與對照組相比，Snail轉染組Snail、Vimentin、SMA在基因和蛋白水平表達均升高，E-