熏蒸劑對姜根際細菌群落結構的影響及姜內(nèi)生理細菌的多樣性分析.pdf

1、本文在山東泰安邱家店布置試驗，分別在生姜種植期、苗期、旺盛生長期前期、后期和根莖膨大期前期、后期采集無熏蒸劑處理、溴甲烷熏蒸、氯化苦熏蒸的生姜根際土壤樣品。采用T-RFLP和構建16S rDNA文庫的方法，并且結合RDA，CCA等統(tǒng)計學方法探討了使用熏蒸劑對生姜根際細菌群落結構的影響，并且篩選生姜內(nèi)生有益細菌研究其遺傳多樣性。
　　 T-RFLP分析表明，使用熏蒸劑處理后的土壤中，在生姜的種植期和苗期，細菌的多樣性要明顯低于沒有

2、使用熏蒸劑處理的樣品;而當進入旺盛生長期之后，熏蒸劑效果逐漸減弱，根際土壤中的細菌種類和數(shù)量又開始逐漸增加，當進入根莖膨大期后期之后，使用熏蒸劑處理過的生姜根際土壤細菌的多樣性仍然要比無處理的樣品要低。
　　 16S rDNA克隆文庫的結果顯示，經(jīng)過氯化苦處理的土壤樣品中，在生姜的種植期，占優(yōu)勢的菌群為厚壁菌門(21.1％)和γ-變形桿菌門(36.8％)，而無處理的土壤樣品中這兩種菌并不占優(yōu)勢，無處理的土壤樣品中占優(yōu)勢的菌群為放

3、線菌門(25.9％)和擬桿菌門(37％)。而且，在種植期時與無處理的土壤樣品相比，氯化苦處理過的土壤樣品中少了放線菌門和芽單胞菌門;在苗期時，缺少了芽單胞菌門、疣微菌門、浮霉菌門和硝化螺菌門，說明熏蒸劑的使用嚴重影響了生姜根際土壤中的細菌群落結構。
　　 通過對土壤樣品理化性質(zhì)的測定，我們發(fā)現(xiàn)，在生姜的種植期以及苗期，使用熏蒸劑熏蒸后的土壤中，有機質(zhì)的分解速率和腐殖質(zhì)的降解速率都要比無處理的低很多，而且對速效磷、速效鉀以及鐵錳銅

4、鋅等微量元素的積累速率和積累量都產(chǎn)生了嚴重的影響，雖然后期隨著微生物種類的逐漸恢復，這一影響有所減弱，但是，使用熏蒸劑嚴重影響了土壤中的各礦物元素的互相轉化，不僅影響了生姜的正常生長，而且容易使土壤板結。
　　 采用R2A培養(yǎng)基分離生姜內(nèi)生細菌，結果顯示，生姜內(nèi)生細菌的數(shù)量在10.4×104cfu/gFW到20.2×104 cfu/g FW之間，內(nèi)生細菌的最大數(shù)量出現(xiàn)在生姜的苗期。結合菌落和細菌形態(tài)觀察，我們共分離得到了248株

5、內(nèi)生細菌，其中90株具有產(chǎn)吲哚乙酸(IAA)的能力，而17株具有拮抗能力。根據(jù)ARDRA和16S rDNA分析，這107株內(nèi)生細菌共分為16個屬。其中芽孢桿菌（Bacillus）、假單胞菌（Pseudomonas）以及腸桿菌屬（Enterobacter）是優(yōu)勢菌群，而且內(nèi)生細菌多樣性最高的時期是苗期，這與菌落計數(shù)的結果是一致的。17株具有拮抗效果的內(nèi)生細菌中，16株對生姜莖腐病具有拮抗效果，6株對生姜半點病有拮抗效果，其中芽孢桿菌是拮抗

6、菌的優(yōu)勢菌種。在產(chǎn)LAA的內(nèi)生細菌中，熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)、巨大芽孢桿菌（B.megaterium）以及Enterobacter ludwigii具有最高的產(chǎn)吲哚乙酸的能力。使用濾紙片法檢測具有生防功能的內(nèi)生細菌是否能夠被鮮姜汁的抑制的實驗發(fā)現(xiàn)，只有少數(shù)幾株能夠被抑制，而且大部分是在苗期分離到的，包括:Roseateles depolymerans，Chryseobacterium taiwan