間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的作用研究.pdf

1、目的：
　　通過比較由單獨(dú)神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）移植治療大鼠脊髓損傷（SCI）和由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）與NSCs序貫治療大鼠SCI后大鼠脊髓恢復(fù)情況的不同，研究BMSCs對(duì)大鼠脊髓微環(huán)境的影響以及序貫治療的可行性和優(yōu)勢。
　　方法：
　　體外分離，培養(yǎng)，純化NSCs和BMSCs，慢病毒轉(zhuǎn)染標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞，改良Allen法制造大鼠脊髓損傷（SCI）模型，將48只大鼠隨機(jī)分為單獨(dú)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞移植組（A組，n=2

2、4），間充質(zhì)干細(xì)胞+標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞序貫移植組（B組,n=24）。A組大鼠在T9脊髓損傷后3d經(jīng)尾靜脈注射單細(xì)胞濃度為1?106/ml的POLY-M慢病毒轉(zhuǎn)染后的NSCs條件培養(yǎng)液2ml；B組大鼠在T9脊髓損傷后1d經(jīng)尾靜脈注射單細(xì)胞濃度為1?106/ml的BMSCs條件培養(yǎng)液1ml，脊髓損傷后3d經(jīng)尾靜脈注射單細(xì)胞濃度為1?106/ml的POLY-M慢病毒轉(zhuǎn)染后的NSCs條件培養(yǎng)液2ml。每3只大鼠一組分籠飼養(yǎng)，由兩名未參與分組的研究生

3、對(duì)兩組大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分，記錄數(shù)據(jù)。分別于移植當(dāng)天，移植后3天、1周、2周，3周、4周、6周、8周各取出A、B組3只大鼠，灌注法取脊髓損傷區(qū)的脊髓組織，福爾馬林固定，制成石蠟切片，行HE染色和MAP-2以及GFAP免疫組化染色，觀察脊髓空洞形成情況，神經(jīng)干細(xì)胞分化生長情況，以及脊髓膠質(zhì)疤痕大小。
　　結(jié)果:
　　序貫移植組BBB評(píng)分比單獨(dú)神經(jīng)干細(xì)胞移植組高（P<0.05）；觀察大鼠在治療后1，2，3，4，6，8周時(shí)的神經(jīng)元細(xì)