法夫酵母類胡蘿卜素的提取純化及生物活性研究.pdf

1、類胡蘿卜素(Carotenoid)是一類普遍存在于植物、動(dòng)物和微生物中的色素，具有抗氧化、抗炎、抗糖尿病、抗癌、預(yù)防心血管疾病和提高免疫力等生物活性，在食品、藥品和化妝品等行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。本論文以高產(chǎn)類胡蘿卜素的法夫酵母（Phaffia rhodozyma簡(jiǎn)寫P.rhodozyma）為原料，優(yōu)化其類胡蘿卜素的提取條件，并研究類胡蘿卜素提取物(Carotenoid crude extract，簡(jiǎn)稱CCE)對(duì)老齡小鼠抗氧化作用以及對(duì)大鼠

2、抗化學(xué)肝損傷輔助保護(hù)作用;優(yōu)化高速逆流色譜(HSCCC)分離類胡蘿卜素的條件，進(jìn)一步結(jié)合柱層析、HPLC、質(zhì)譜和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)類胡蘿卜素進(jìn)行分離純化和鑒定;并研究蝦青素(Astaxanthin)對(duì)胰脂肪酶(Pancreatic lipase，簡(jiǎn)稱PL)的抑制作用機(jī)理。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)單因素及正交實(shí)驗(yàn)，得到P.rhodozyma中類胡蘿卜素的最佳提取條件為:以丙酮為提取溶劑，破壁溫度30℃，乳酸用量1∶20，料液比1∶2

3、0，浸提時(shí)間5min。
　　(2)采用優(yōu)化的HSCCC條件:溶劑體系為正己烷-丙酮-乙醇-水(1.2∶1∶1∶0.8，v/v/v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)474 nm,流速3mL/min，溫度25℃，轉(zhuǎn)速850 rpm，上樣濃度20 mg/mL，上樣量10 mL，并進(jìn)一步通過(guò)柱層析分離，從P.rhodozyma中得到5個(gè)樣品。結(jié)合HPLC、質(zhì)譜和標(biāo)準(zhǔn)品確定其中3個(gè)樣品分別為β-胡蘿卜素、海膽酮和蝦青素。
　　(3)通過(guò)給老齡小鼠灌胃C

4、CE后，發(fā)現(xiàn)CCE的低、中和高劑量組均能顯著降低血清中MDA、蛋白質(zhì)羰基含量以及GSH的活性，并能提高SOD活力，說(shuō)明CCE對(duì)老齡小鼠有抗氧化作用。
　　(4)通過(guò)建立四氯化碳肝損傷模型研究CCE對(duì)大鼠化學(xué)性肝損傷輔助保護(hù)作用。發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組血清中ALT、AST顯著升高，CCE的高劑量組動(dòng)物血清中ALT相比模型對(duì)照組出現(xiàn)了降低，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)不同劑量的CCE對(duì)大鼠肝臟具有一定程度的保護(hù)作用，說(shuō)明CCE對(duì)大鼠的化學(xué)性

5、肝損傷具有輔助保護(hù)作用。
　　(5)采用酶動(dòng)力學(xué)、圓二色譜、熒光光譜以及分子對(duì)接等方法研究蝦青素對(duì)PL的抑制作用及其作用機(jī)理。發(fā)現(xiàn)蝦青素對(duì)PL具有較強(qiáng)的抑制作用，其IC50值為38.2μg/mL，其抑制類型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制類型。蝦青素與PL相互作用時(shí)，使PLα-螺旋含量降低，β-轉(zhuǎn)角含量增加。增大蝦青素濃度能使PL最大波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度降低，但PL最大發(fā)射波長(zhǎng)沒(méi)有發(fā)生改變，表明蝦青素對(duì)PL的色氨酸熒光產(chǎn)生了熒光淬滅，并未改變PL色氨酸