mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎著床前后子宮內(nèi)膜中的表達及作用.pdf

1、胚胎能否成功著床取決于子宮內(nèi)膜和胚泡間的同步協(xié)調(diào)反應(yīng)。在此過程中，子宮內(nèi)膜生理變化所依賴的一系列細(xì)胞因子的差異表達起著關(guān)鍵作用。有研究表明MicroRNAs(miRNAs)在基因差異表達的精細(xì)調(diào)控中發(fā)揮了重要作用。課題組前期應(yīng)用miRNAs芯片技術(shù)對早孕小鼠胚胎著床前后子宮內(nèi)膜miRNAs的表達進行研究，發(fā)現(xiàn)孕6天(d6)和孕4天(d4)相比mmu-miR-141明顯下調(diào)。本文以mmu-miR-141為研究對象深入探討mmu-miR-1

2、41在早孕小鼠胚胎著床前、后子宮內(nèi)膜中的表達及作用，為進一步了解胚胎著床的分子機制提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、熒光定量PCR(FQ-PCR)驗證芯片結(jié)果，原位雜交方法檢測mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎著床前、后子宮內(nèi)膜組織中的定位表達；
　　2、MTT法檢測mmu-miR-141抑制劑對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測mmu-miR-141抑制劑對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響；<

3、br>　　3、應(yīng)用miRNAs的靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫檢索mmi-miR-141調(diào)控的靶基因；
　　4、在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中，分別瞬時轉(zhuǎn)染mmu-miR-141的模擬物和抑制劑，并用Western Blot檢測PTEN的表達；
　　5、于孕d2天行小鼠子宮角注射mmu-miR-141的模擬物和抑制劑，孕d7天觀察并計數(shù)胚胎數(shù)。
　　實驗結(jié)果：
　　1、FQ-PCR結(jié)果顯示mmu-miR-141在著床后(d6)小鼠子宮內(nèi)

4、膜組織中的表達較著床前(d4)下調(diào)(P<0.05)，且與芯片結(jié)果一致；
　　2、原位雜交結(jié)果顯示mmu-miR-141主要定位于基質(zhì)細(xì)胞，在腔上皮和腺上皮中幾乎沒有表達。著床后(d6)表達強度較著床前(d4)降低(P<0.05)；
　　3、瞬時轉(zhuǎn)染mmu-miR-141的抑制劑作用于小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞后，MTT檢測結(jié)果顯示下調(diào)mmu-miR-141的表達，小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖活性隨之下降(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測

5、結(jié)果顯示下調(diào)mmu-miR-141表達時，細(xì)胞被阻滯在S期，且細(xì)胞凋亡率明顯增加(P<0.01)；
　　4、經(jīng)生物信息學(xué)分析和綜合前期的實驗結(jié)果分析得到mmu-miR-141作用的靶基因有PTEN、PDCD4和.KLF6，且PTEN可能性大；
　　5、采用mmu-miR-141的模擬物或抑制劑分別上調(diào)或下調(diào)mmu-miR-141表達時，PTEN的mRNA表達水平均不受影響。但是，當(dāng)下調(diào)mmu-miR-141的表達時，PTEN

6、蛋白表達顯著增強，而上調(diào)mmu-miR-141的表達時，PTEN蛋白表達水平明顯降低；
　　6、采用子宮角注射mmu-miR-141的抑制劑和模擬物，均導(dǎo)致胚胎著床數(shù)明顯下降。
　　結(jié)論：
　　1、mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎著床前(d4)后(d6)子宮內(nèi)膜組織中存在著明顯差異的表達，胚胎著床后較胚胎著床前顯著降低。
　　2、mmu-miR-141可能通過靶向作用PTEN基因的表達來調(diào)控子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的