miR--200a在骨肉瘤中表達水平及臨床意義.pdf

1、骨肉瘤是一種好發(fā)于兒童和青少年的原發(fā)性惡性骨腫瘤，其發(fā)病率居于原發(fā)性骨腫瘤之首，它們大多發(fā)生于四肢的長管狀骨，尤其是股骨遠端和脛骨近端，由于腫瘤組織生長迅速、侵襲能力強、早期轉移等特點，周圍正常的骨組織常常被腫瘤所侵蝕，給病人的生活帶來巨大影響。近幾十年以來，由于提出了新輔助化療理念、術后放化療治療水平的提高再加上外科手術技術提升，過去傳統(tǒng)的截肢術逐漸被新輔助化療聯(lián)合保肢手術所取代，骨肉瘤患者的五年生存率顯著提高至60～70％，但由于骨

2、肉瘤的高度侵襲性和早期轉移以及對化療藥物耐藥，加上目前暫無敏感性和特異性較高的腫瘤標志物，骨肉瘤患者在前來就診時大多數已進入癌癥晚期階段，所以患者的腫瘤復發(fā)率和死亡率仍無明顯改善。因此，迫切需要探索涉及骨肉瘤發(fā)展的潛在分子機制，以對骨肉瘤進行早期診斷及探尋新的治療方式來改善骨肉瘤患者的預后及其生活質量。
　　樹突狀細胞(dendritic cell，DC)是作為一類特定的抗原呈遞細胞被大家熟知，它們在人體中分布廣泛，普遍分布于血液

3、，組織和淋巴器官中。它們被認為是免疫系統(tǒng)的中心，功能是橋接特異性免疫系統(tǒng)和非特異性免疫系統(tǒng)，可以產生強大的免疫應答。近十年以來，基于DC的癌癥免疫療法圍繞著DC的這些功能來開展，旨在通過疫苗接種開發(fā)針對癌癥的免疫治療策略。為此，必須更好地了解DC免疫生物學，調節(jié)先天免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)以及腫瘤微環(huán)境，以及應用科學的最新進展，以提高其巨大的抗腫瘤免疫治療潛力。
　　微小RNA是一類長度約為19～25個核苷酸片段具有調節(jié)功能的非編

4、碼RNA分子。miRNA通過與靶mRNAs的3'非翻譯區(qū)(UTR)堿基互補配對誘導信使RNA(mRNA)降解或通過與種子序列不完全堿基配對抑制mRNA翻譯來調節(jié)靶基因的表達。在人類癌癥中觀察到miRNA的異常表達，并且已經顯示其參與多種關鍵的細胞過程，包括細胞分化，增殖和代謝。
　　DC由發(fā)育和功能不同的亞群組成，已經發(fā)現(xiàn)不同DC族的發(fā)育受不同細胞因子和轉錄因子的網絡調節(jié)。此外，DC的反應受到嚴格調控以維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。在免疫系

5、統(tǒng)中，miRNA在造血發(fā)育和細胞亞群分化過程中在檢查點起作用，它們調節(jié)效應細胞功能，并牽涉維持動態(tài)平衡。DCs受miRNA的調控，在過去的十年中，miRNA在調節(jié)DC發(fā)育和功能中的作用已經取得了很大進展?；诠侨饬龅闹委煬F(xiàn)狀，以樹突狀細胞為基礎的免疫治療可以作為一種非常有前景的治療方式來開展。
　　目的：
　　本研究通過比較miRNA-200a在骨肉瘤組織與癌旁組織、骨肉瘤患者及健康體檢者外周血、骨肉瘤細胞系及正常成骨細胞中

6、的表達水平差異，并分析其與臨床病例參數的關系，為以樹突狀細胞為基礎的骨肉瘤的免疫治療提供一定的理論基礎。
　　方法：
　　選取鄭州大學第一附屬醫(yī)院骨科及小兒外科2015年10月至2017年10月收治行骨肉瘤切除手術、病理診斷明確的40例骨肉瘤患者，征得骨肉瘤患者及家屬同意，所有納入研究的骨肉瘤患者均需排除骨肉瘤以外其他系統(tǒng)腫瘤。收集這些患者手術當日的外周靜脈血5ml、術中收集癌組織、癌旁組織及癌旁未被侵犯的組織，其中男20例

7、，女20例，年齡介于10～48歲之間，新鮮手術標本切除后用生理鹽水沖洗干凈并迅速保存于-80℃低溫冰箱中待用。另外收集患者臨床資料，如腫瘤大小、腫瘤浸潤情況、淋巴結有無轉移以及其他臟器有無轉移等，同時收集本院至門診體檢的40例健康人血液標本5ml放置于-80℃低溫冰箱中保存待用。培養(yǎng)人U2OS骨肉瘤細胞系和人hFOB1.19成骨細胞系，通過qRT-PCR檢測miRNA-200a在標本和細胞中的表達水平的不同，并分析它們與患者臨床資料的關

8、系。
　　結果：
　　1.檢測miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織及骨肉瘤細胞系中的表達水平
　　運用qRT-PCR實驗方法檢測骨肉瘤患者癌組織及癌旁組織、人骨肉瘤細胞系U2OS與人成骨細胞系hFOB1.19中miRNA-200a的表達水平，結果顯示癌組織中miRNA-200a表達量低于癌旁組織，兩組差異比較具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，骨肉瘤細胞中miRNA-200a表達量低于人成骨細胞，兩組差異比較具有統(tǒng)計學意

9、義(P＜0.05)，這意味著miRNA-200a在骨肉瘤組織和骨肉瘤細胞系中低表達。另外通過對比不同性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤生長位置、病理類型、有無轉移及不同生存情況等組間骨肉瘤組織miRNA-200a表達水平的差異，結果顯示死亡組和轉移組miRNA-200a表達水平高于存活組和非轉移組(P＜0.05)，提示miRNA-200a可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移和患者生存中發(fā)揮重要的作用。
　　2.檢測miRNA-200a在骨肉瘤患者

10、外周血中的表達水平
　　運用qRT-PCR實驗方法比較40例骨肉瘤患者與40例門診體檢的健康人血清當中miRNA-200a表達水平。結果顯示相對于門診體檢的健康人，骨肉瘤患者血清中miRNA-200a表達量升高，兩組數據對比結果顯示差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論：
　　miRNA-200a在骨肉瘤患者癌組織表達下調，在其血清中表達上調，表明它可能在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移和患者生存中發(fā)揮重要的作用，可為以樹