溶菌酶和重組人干擾素-γ包涵體體外折疊復(fù)性的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、迄今為止,人們對(duì)確信存在的第二遺傳密碼——蛋白質(zhì)折疊密碼還知之甚少.如何對(duì)包涵體蛋白進(jìn)行高濃度、高收率的復(fù)性以獲得活性產(chǎn)品是人們經(jīng)常面臨的一個(gè)難題,現(xiàn)已成為生物工程產(chǎn)業(yè)化的瓶頸之一.為此,該文對(duì)模型蛋白溶菌酶和基因工程藥物人干擾素-γ包涵體蛋白的體外折疊復(fù)性進(jìn)行了研究,以期促進(jìn)這一問(wèn)題的早日解決.首先以溶茵酶為模型蛋白,通過(guò)研究還原劑二硫蘇糖醇(DTT)對(duì)其變復(fù)性過(guò)程中自由巰基和復(fù)性的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)若蛋白質(zhì)濃度不超過(guò)40mg/mL,變性

2、液中DTT最適濃度為30 mM,這樣直接稀釋復(fù)性時(shí)無(wú)需脫除DTT,簡(jiǎn)化了后續(xù)的復(fù)性過(guò)程.溶菌酶的變性程度對(duì)復(fù)性效果有重要影響,因此研究了溶菌酶合適的變性條件,達(dá)到了提高復(fù)性收率的目的.稀釋復(fù)性法是研究其他方法的基礎(chǔ).通過(guò)對(duì)高濃度溶菌酶的直接稀釋復(fù)性法的研究,發(fā)現(xiàn)最適GSH濃度為3~6mM,GSH:GSSG則為2~5,此外還需添加3~4M脲.同時(shí)在此范圍內(nèi),合適腺濃度隨蛋白質(zhì)濃度增加略有增大.與一步稀釋復(fù)性法相比,分步流加變性溶菌酶的復(fù)性

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