成骨細胞與誘導劑對骨髓基質(zhì)細胞的增殖與成骨分化的影響.pdf

1、目的:研究成骨細胞與誘導劑對骨髓基質(zhì)細胞(MSCs)的增殖與分化的影響,探索一種新的骨組織工程種子細胞的體外培養(yǎng)體系.方法:骨髓基質(zhì)細胞由于其強大增殖能力及多向分化潛能而成為骨組織工程的種子細胞.本實驗研究乳大鼠顱骨來源的成骨細胞與誘導劑(地塞米松、β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸)對大鼠股骨、脛骨來源的MSCs生長的影響.實驗共分4組,對照組:DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)MSCs;誘導劑組:成骨誘導液培養(yǎng)MSCs;成骨細胞組:在DMEM培養(yǎng)液中通過插入

2、式培養(yǎng)皿以2:1的比例間接混合培養(yǎng)MSCs和成骨細胞,細胞因子可通過培養(yǎng)皿底部半透膜的微孔;聯(lián)合誘導組:在成骨誘導液中進行如成骨細胞組的細胞間接混合培養(yǎng).計數(shù)培養(yǎng)8d內(nèi)每天的MSCs數(shù)量,繪制細胞生長曲線;檢測培養(yǎng)10d時MSCs的堿性磷酸酶(ALP)活性;檢測細胞總蛋白量,計算ALP相對活性(即單位質(zhì)量蛋白的ALP活性):采用逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(RT-PCR)檢測培養(yǎng)2w后MSCs的骨鈣素(OC)mRNA的表達量.結(jié)果:生長曲線顯示8d內(nèi)

3、4組細胞數(shù)量均隨培養(yǎng)時間延長而增加.3個誘導組分別與對照組比較:后4d內(nèi)誘導劑組的細胞數(shù)量少于對照組而成骨細胞組的細胞數(shù)量高于對照組(P<0.05);8d內(nèi)聯(lián)合誘導組與對照組的細胞數(shù)量相比均無顯著性差異(P>0.05).培養(yǎng)10d時4組均表達ALP,4組中聯(lián)合誘導組的ALP活性最高(P<0.05).誘導劑組與聯(lián)合誘導組的ALP相對活性均高于成骨細胞組(P<0.05),而誘導組與成骨細胞組之間的ALP相對活性比較無顯著性差異(P>0.05

4、).成骨細胞組的ALP活性及ALP相對活性與對照組相比均無統(tǒng)計學意義.培養(yǎng)2w時對照組不表達骨鈣素mRNA而3個誘導組均表達,誘導劑組的骨鈣素mRNA的表達要明顯高于成骨細胞組(P<0.05),聯(lián)合誘導組與誘導劑組的骨鈣素mRNA比較無統(tǒng)計學意義.結(jié)論:間接混合培養(yǎng)狀態(tài)下成骨細胞促進MSCs增殖作用強而誘導MSCs成骨分化作用弱,誘導劑抑制MSCs增殖而誘導MSCs成骨分化作用強.聯(lián)合使用成骨細胞與誘導劑,發(fā)揮成骨細胞的促增殖作用和誘導