成人急性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后分子標(biāo)記CRLF2和SH2B3特征研究.pdf

1、第一部分成人急性淋巴細(xì)胞白血病CRLF2突變特點(diǎn)、表達(dá)水平及其臨床意義
　　目的:細(xì)胞因子受體樣因子2（cytokine receptor-like factor2，CRLF2）可促進(jìn)早期B淋巴細(xì)胞的增殖，對(duì)正常B淋巴細(xì)胞的發(fā)育起著重要的作用。本研究將探討成人急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）中CRLF2突變特點(diǎn)、表達(dá)水平及其與預(yù)后關(guān)系。
　　方法:本研究通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

2、(polymerase chain reaction，PCR)方法，特異性擴(kuò)增129例成人ALL患者CRLF2外顯子(exon)1-6，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定、DNA純化、sanger測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)比對(duì)，分析突變類(lèi)型、突變發(fā)生率及其臨床特點(diǎn)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)方法，檢測(cè)CRLF2表達(dá)水平。分析CRLF2在B-ALL、T-ALL以及正常對(duì)照之間可能存在的表達(dá)差異。分析CRLF2表達(dá)水

3、平與IKZF1缺失可能存在的關(guān)系及其臨床意義。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS20.0軟件，計(jì)量資料采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)（或Fisher精確檢驗(yàn)），采用Kaplan-Meier檢驗(yàn)對(duì)ALL患者進(jìn)行生存分析及預(yù)后關(guān)系研究。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:本組CRLF2共檢測(cè)到6種基因改變類(lèi)型，其中P224L、R186S提示預(yù)后良好，L86I、 F232F、W255C可能與預(yù)后不良有關(guān)。在無(wú)I

4、KZF1缺失的患者中，A11A突變組的RFS明顯長(zhǎng)于野生型組。CRLF2在ALL患者表達(dá)水平明顯高于正常人。CRLF2高表患者預(yù)后較差，總生存期明顯低于CRLF2低表組。CRLF2表達(dá)水平與IKZF1缺失有關(guān)，IKZF1缺失患者的CRLF2表達(dá)水平明顯高于無(wú)IKZF1缺失患者。提示CRLF2與IKZF1之間可能存在功能上的聯(lián)系。
　　結(jié)論:CRLF2突變及表達(dá)水平異常在成人ALL的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，本組檢測(cè)到的新型突變R18

5、6S、 P224L與預(yù)后良好有關(guān)，CRLF2表達(dá)水平增高往往提示不良預(yù)后。
　　第二部分 SH2B3在中國(guó)成人急性淋巴細(xì)胞白血病中的突變研究
　　目的:SH2B3(Src homology2 B3)編碼SH2配體適應(yīng)蛋白LNK，可以抑制JAK-STAT信號(hào)通路和細(xì)胞因子信號(hào)通路的激活，SH2B3的失活突變，可以導(dǎo)致JAK-STAT信號(hào)通路激活，從而引起急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblasticleukemia

6、，ALL)的發(fā)生。本組將研究成人ALL患者SH2B3突變特征及其臨床意義。
　　方法:使用PCR及巢式PCR的方法，特異性擴(kuò)增SH2B3外顯子，其后進(jìn)行DNA純化、測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與NCBI-BLAST進(jìn)行比對(duì)，分析突變類(lèi)型、突變發(fā)生率及其臨床特點(diǎn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS20.0軟件，計(jì)量資料采用非參數(shù)Mann-Whitney檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)（或Fisher精確檢驗(yàn)），采用二元Logistic回歸、Kaplan-Meier

7、檢驗(yàn)、COX回歸對(duì)ALL患者進(jìn)行生存分析及預(yù)后關(guān)系研究。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:本組107例初發(fā)ALL患者共檢測(cè)到兩種基因改變類(lèi)型，c.724C＞T，p.P242S及c.784T＞C，p.W262R。經(jīng)過(guò)比對(duì)，兩種基因改變均為單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotide polymorphisms，SNP)類(lèi)型，分別為rs3184504和rs78894077。其中SH2B3 P242S基因改變組的EFS、OS