抗GB1-VFT的卵黃抗體在蛋白質組學應用中的初步研究.pdf

1、蛋白質組學研究是繼基因組學研究后的生命科學發(fā)展的又一個研究熱點。蛋白質的結構和功能最終直接影響著生命活動的變化，基因轉錄水平的研究只能在一定程度上反映基因表達產物的變化，而真正發(fā)揮功能的蛋白要經過轉錄后加工、翻譯調控以及翻譯后加工等許多步驟和調控才能形成，因而對蛋白質的直接研究才能真實的解釋各種生命現象。但是目前研究蛋白質的手段和方法還沒有很大的發(fā)展，所以尋找有效、快捷的蛋白分析技術成為了一個至關重要的環(huán)節(jié)。蛋白芯片技術的出現給蛋白組學

2、研究帶來新思路。蛋白組學研究中一個主要的內容就是要研究在不同生理狀態(tài)或病理狀態(tài)下蛋白水平的量變，微型化、集成化、高通量化的抗體芯片就是一個非常好的研究工具，它也是蛋白芯片中發(fā)展最快，在技術上已日益成熟。這些抗體芯片有的已經在向臨床應用上發(fā)展，比如腫瘤標志物抗體芯片等，多數則用在科學研究的各個領域。
　　 本研究結合實驗室在細胞信號轉導方面的優(yōu)勢和加拿大McGill University進行蛋白質組學研究合作，主要負責抗體芯片開發(fā)

3、工作中抗體制備工作，包括質粒的構建、表達、純化以及抗體制備，主要制備的是針對信號轉導中通路蛋白的抗體，包括PAK1、RhoA、Rac1、MEK1、Rho-GAP、SH3(2)-NCK、SH2(2)-PLC、C-SRC等（注釋見附錄）。首先制備了抗GB1-VFT（γ-氨基丁酸受體B第一亞型配體結合區(qū)）的卵黃抗體IgG（簡稱IgY），由于卵黃抗體芯片檢測過程中還需要用到特異性好，效價高且穩(wěn)定性強的二抗，因此也制備了針對IgY的Fc端的單克隆