優(yōu)化的砷鎘鉛混合物誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的并且最具有侵襲性的原發(fā)性腦腫瘤，預(yù)后極差，因?yàn)樗幬锿ㄟ^(guò)血腦屏障(BBB)還是一個(gè)需要解決的問(wèn)題。膠質(zhì)瘤細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡減弱，促進(jìn)增殖和侵襲性。因此，誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡是一種降低腦膠質(zhì)瘤的侵襲性很有前途的治療策略。已經(jīng)有研究證明砷、鎘、鉛對(duì)癌癥具有抗惡性細(xì)胞增生和促細(xì)胞凋亡作用。因此，假設(shè)能夠滲透血腦屏障的As+Cd+Pb可能會(huì)影響惡性膠質(zhì)瘤的生存能力，并將其作為一種化學(xué)治療劑進(jìn)行研究。假設(shè)As+Cd

2、+Pb混合物的作用要大于單種金屬的作用。評(píng)估了重金屬混合物對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞株潛在的細(xì)胞凋亡的影響。并且對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)變化的可能性進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通道的調(diào)制進(jìn)行了探討?？偟膩?lái)說(shuō)，我們的研究識(shí)別了As+Cd+Pb混合物對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的影響機(jī)制。
　　方法:
　　細(xì)胞培養(yǎng)和MTT試驗(yàn)，DNA片段化-細(xì)胞凋亡測(cè)試，復(fù)合指數(shù)計(jì)算，免疫印跡，免疫細(xì)胞化學(xué)，統(tǒng)計(jì)分析.
　　結(jié)果:<

3、br>　　分析了As+Cd+Pb組合對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的影響，首先確定了單種金屬的致死濃度(LC)，然后，對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行不同濃度的As+Cd+Pb處理，包括LC-5（As:5μM，Cd:2.5μM和Pb:15μM）以及兩倍或三倍LC-5濃度。As+Cd+Pb引起C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生存能力的劑量依賴性降低。通過(guò)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP末端標(biāo)記發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞死亡歸咎于DNA片段碎裂。半胱天冬酶-9(caspase-9)的裂解表達(dá)增

4、強(qiáng)，表明細(xì)胞凋亡是由線粒體介導(dǎo)的。隨著促凋亡蛋白Bax的增加以及抗凋亡蛋白Bcl2的減少，Bax/Bcl2比值大于1.0，證明了線粒體途徑的細(xì)胞凋亡。探索凋亡調(diào)節(jié)機(jī)制揭示了C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞形態(tài)的改變和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的增強(qiáng)，表明與活化的caspase-9存在共定位。膠質(zhì)細(xì)胞活化伴隨著炎癥反應(yīng)，涉及白細(xì)胞介素-1（IL-1）和IL-1受體表達(dá)的上調(diào)。IL-1也會(huì)引發(fā)細(xì)胞凋亡，拮抗IL-1受體后cleaved c

5、aspase-9明顯減少。磷酸化p38的表達(dá)增加證實(shí)p38的活化和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)參與。利用p38-MAPK抑制劑SB203580能夠抑制caspase-9的活化，從而進(jìn)一步證實(shí)p38-MAPK參與介導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　目前的研究表明，優(yōu)化濃度的砷鎘鉛混合物(As+Cd+Pb)對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞系是有毒性作用的。劑量依賴性細(xì)胞凋亡的增加導(dǎo)致C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞數(shù)目的減少。Bax/Bcl2比例上升導(dǎo)致