針刺大腸俞募穴對功能性便秘小鼠EGC細胞形態(tài)學及GDNF表達影響的研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬以功能性便秘為研究對象，以功能性便秘動物模型為研究載體，從影響胃腸動力的關鍵環(huán)節(jié)EGC、GDNF入手，探討大腸俞募配穴治療功能性便秘的效應及其外周作用機制。
　　方法：
　　采用64只SPF級別的KM小鼠，雌雄各半，隨機分為空白對照組，模型組，針刺組，EGC組4個組，每組16只小鼠。以治療時間一周為一個療程，每組動物根據治療時長各分為一周和二周兩個亞組，每個亞組8只，分別于接受一周和二周的針刺后取標

2、本檢測。空白對照組給予0.9％生理鹽水以10mg/kg·d的劑量進行灌胃，灌胃容量為0.1ml/10g，持續(xù)14d。模型組、針刺組和EGC組采用復方地芬諾脂混懸液以10mg/kg·d的劑量進行灌胃，灌胃容量為0.1ml/10g，持續(xù)14d。造模結束后，空白對照組和模型組只固定不針刺，針刺組和EGC組接受一周和二周的針刺治療，其中EGC組在接受針刺治療之前須進行EGC抑制劑腹腔注射。治療結束后取動物標本，經固定、切片和染色后采用光鏡和電鏡

3、觀察EGC細胞形態(tài)學和結腸組織病理改變情況，以TUNEL染色法檢測EGC細胞凋亡情況，以及使用免疫組化技術與原位雜交技術對結腸組織中GDNF蛋白及mRNA的含量進行檢測，比較組間差異。
　　結果：
　　1．組織形態(tài)學結果：光鏡和電鏡下可見空白對照組結腸組織神經叢豐富、EGC細胞形態(tài)正常。模型組，針刺組，EGC組結腸組織均有不同程度的病理性形態(tài)學改變，如EGC細胞變性或細胞結構不完整、黏膜神經叢水腫、炎性細胞浸潤等，其中針刺組

4、病理改變最輕。
　　2．TUNEL細胞凋亡檢測結果：經過對凋亡細胞陽性率進行統(tǒng)計學分析，針刺一周、二周組與模型一周、二周組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），EGC組與模型組相比EGC細胞凋亡率有所下降，但與針刺組相比仍有一定差距。
　　3．GDNF蛋白表達結果：模型組結腸組織中GDNF蛋白表達水平顯著降低（與空白對照組比較P<0.01）。針刺大腸俞募穴可提高結腸組織中GDNF蛋白及其mRNA的表達水平（針刺一周、二周組及EG

5、C二周組與模型組比較均P<0.05）。EGC一周組顯示結腸組織中GDNF蛋白表達與模型組比較無差異（P＞0.05），與針刺組比較顯著降低（P<0.05）。
　　4．GDNFmRNA表達結果：模型組結腸組織中GDNFmRNA蛋白表達水平相比空白對照組顯著降低（P<0.01）。針刺大腸俞募穴可提高結腸中GDNFmRNA的表達水平（針刺組、EGC組與模型組比較均P<0.05）。EGC組GDNFmRNA的表達水平高于模型組（P<0.05）