體外共培養(yǎng)條件下種植窗期子宮內(nèi)膜與胚胎相互作用的研究.pdf

1、背景及目的:醫(yī)學(xué)發(fā)展的不斷進(jìn)步，總會(huì)有震驚世界的奇跡出現(xiàn)。20世紀(jì)世界首例試管嬰兒的誕生，讓研究者們看到了打破常規(guī)的生育方法，為數(shù)以萬(wàn)計(jì)的不孕患者解決了生育難題。不孕癥不僅在國(guó)外多發(fā)，在國(guó)內(nèi)，飽受生育困難的不孕夫婦也不在少數(shù)。在中國(guó)，傳宗接代已成為每個(gè)家庭的必須，生育一個(gè)健康的寶寶成了多數(shù)家庭的渴望。輔助生殖技術(shù)的發(fā)展為許多不孕患者帶來(lái)希望，在某種程度上，不僅維系了家庭的和諧，更為社會(huì)的和諧提供了支點(diǎn)。
　　ART技術(shù)發(fā)展已有30

2、余年，但成功率仍有待進(jìn)一步提高。在正常女性月經(jīng)周期中，胚胎著床是在很短的時(shí)間內(nèi)完成的。這一過程十分復(fù)雜，能否成功妊娠的關(guān)鍵就取決于子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力。母體子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力，即為子宮內(nèi)膜容受性（endometrial receptivity）?！胺N植窗期”（implantation window）通常發(fā)生于正常女性月經(jīng)周期排卵后第6-7天，此時(shí)，子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力達(dá)到最佳狀態(tài)，子宮內(nèi)膜容受性最高，胚胎能夠順利著床。已有

3、廣泛學(xué)者研究證明，人類白血病抑制因子（LIF）和胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)可同時(shí)作用于子宮內(nèi)膜和胚胎，兩者的表達(dá)在女性黃體期逐漸升高，在種植窗期達(dá)到高峰，與子宮內(nèi)膜容受性的形成密切相關(guān)，且與子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力呈正相關(guān)，是保證胚胎著床和妊娠成功的關(guān)鍵因子。在臨床工作中，大齡女性患者的卵巢儲(chǔ)備功能下降，卵子質(zhì)量遠(yuǎn)不如年輕女性的理想，取卵后，在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)成的胚胎質(zhì)量較差，移植進(jìn)入宮腔后，胚胎著床能力也就較差，以致于使胚胎種植率和臨床妊娠

4、率始終處于較低水平。因此，國(guó)外已經(jīng)有很多學(xué)者從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)出發(fā)，應(yīng)用共培養(yǎng)技術(shù)來(lái)提高大齡患者的胚胎種植率和臨床妊娠率。到目前為止，研究較為成熟的就是利用子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞作為飼養(yǎng)層，與胚胎構(gòu)建共培養(yǎng)體系，模擬胚胎在母體子宮內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境。由于共培養(yǎng)體系更加接近母體的生長(zhǎng)環(huán)境，可以提供胚胎生長(zhǎng)狀態(tài)下所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)又可以分泌多種有助于胚胎生長(zhǎng)和提高子宮內(nèi)膜容受性的相關(guān)因子，如LIF，IGF，EGF等多種因子，在一定程度上優(yōu)化了胚胎質(zhì)量，促

5、進(jìn)胚胎程序化生長(zhǎng)，提高了胚胎著床能力，進(jìn)一步為后期胚胎種植率和臨床妊娠率的提高做準(zhǔn)備。
　　本實(shí)驗(yàn)以此為背景，在體外條件下共培養(yǎng)子宮內(nèi)膜和胚胎，構(gòu)建體外共培養(yǎng)模型，采用RT-PCR法檢測(cè)與子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的兩個(gè)因子LIF和IGF在子宮內(nèi)膜上的表達(dá)水平，探討其在種植窗期的表達(dá)規(guī)律，并觀察共培養(yǎng)條件下胚胎的生長(zhǎng)情況，分析種植窗期子宮內(nèi)膜與胚胎之間的相互作用及分子對(duì)話，揭示胚胎植入的機(jī)制，探討共培養(yǎng)的優(yōu)越性，進(jìn)一步為優(yōu)化臨床治療方案提

6、供理論依據(jù)。
　　材料和方法:選擇2014年6月到2015年6月在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院生殖中心行人工助孕的10例患者，取卵后因有卵巢過度刺激綜合征傾向，取消移植，這些患者均于取卵后第3天取子宮內(nèi)膜，和實(shí)驗(yàn)室的冷凍年限較久（1-3年），患者已無(wú)生育要求，主動(dòng)廢棄不要的評(píng)分I-II級(jí)的優(yōu)質(zhì)冷凍胚胎組成子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組（A組），以單獨(dú)子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組（B組）和單獨(dú)胚胎培養(yǎng)組（C組）作為對(duì)照組，采用RT-PCR法分別于取卵后D3、D4

7、、D5、D6、D7天檢測(cè)子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組（A組）和單獨(dú)子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組（B組）LIFmRNA和IGFmRNA的表達(dá)水平，并在顯微鏡下觀察子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組（A組）和單獨(dú)胚胎培養(yǎng)組（C組）的胚胎生長(zhǎng)情況，比較其囊胚形成率。研究所采用的數(shù)據(jù)處理軟件是SPSS20.0，所有數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計(jì)分析軟件，用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析進(jìn)行檢測(cè)，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　1.LIF和IGF兩種因子mRNA在子宮內(nèi)膜與胚胎

8、共培養(yǎng)組（A組）呈陽(yáng)性表達(dá)，在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達(dá)量逐漸升高，在D6，D7天呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)量升高最為明顯。
　　2.LIF和IGF兩種因子mRNA在單獨(dú)子宮內(nèi)膜培養(yǎng)組（B組）呈陽(yáng)性表達(dá)，在取卵后D3、D4、D5、D6、D7天表達(dá)量逐漸升高，在D6，D7天呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)量升高最為明顯。
　　3.子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組（A組）的LIF和IGF兩種因子mRNA在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)顯著高于對(duì)照組單獨(dú)子宮內(nèi)膜

9、培養(yǎng)組（B組），且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.在顯微鏡下觀察可見，子宮內(nèi)膜與胚胎共培養(yǎng)組（A組）胚胎碎片少，卵裂球均勻，形態(tài)規(guī)則，胚胎發(fā)育速度相對(duì)單獨(dú)胚胎培養(yǎng)組（C組）較快，桑葚胚形成率，囊胚形成率高于單獨(dú)胚胎培養(yǎng)組（C組）。
　　結(jié)論:
　　1.LIF和IGF兩種因子是子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志性分子。
　　2.排卵后D6，D7天即是種植窗期，此時(shí)子宮內(nèi)膜容受性最佳，子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎接受能力最好，胚胎著床能力最高。