IL-2、IL-12、IL-15、IFNα對NK-92細胞顆粒酶基因表達水平的調控.pdf

1、目的: 人類天然殺傷細胞(NK細胞)是一種具有細胞毒作用的淋巴細胞，在天然免疫中起著重要作用，能迅速誘導病毒感染細胞或者腫瘤細胞的凋亡。NK細胞執(zhí)行殺傷功能的途徑有多種，包括Fas-L、TRAIL、穿孔素-顆粒酶途徑；其中最主要的一條途徑是穿孔素-顆粒酶途徑。當NK細胞和靶細胞接觸后，NK細胞能夠分泌細胞毒顆粒進入靶細胞內。 NK細胞能夠分泌多種顆粒酶，包括顆粒酶A、B、H、K和M。顆粒酶基因在染色體的排列位置接近，而且

2、具有共同的保守序列。顆粒酶B和顆粒酶H基因有90％是一致的；顆粒酶A和顆粒酶K也有很強的同源性。在五種顆粒酶中，顆粒酶B是目前研究最多的一種，而且在殺傷靶細胞中起著至關重要的作用。顆粒酶B殺傷靶細胞是通過半胱天冬酶依賴的凋亡途徑；而顆粒酶A是通過誘導DNA單鏈斷裂來誘導靶細胞凋亡的。因為作用的底物還不清楚，顆粒酶H和顆粒酶K被稱為孤兒酶，并且它們誘導靶細胞凋亡不依賴半胱天冬酶凋亡途徑。顆粒酶M是通過半胱天冬酶依賴的凋亡途徑誘導靶細胞凋亡

3、的。 IL-2、IL-12、IL-15和IFNα是最重要的調節(jié)免疫功能的細胞因子，能夠提高淋巴細胞的細胞毒作用。已經(jīng)有文章報道IL-2、IL-12、IL-15和IFNα可以提高NK細胞殺傷效應分子的表達，促進靶細胞的凋亡。盡管如此，IL-2、IL-12、IL-15和IFNα是否可以調節(jié)顆粒酶的表達，進而改變NK細胞的細胞毒作用，以及它們的調控模式是否一致等一系列科學問題尚不清楚。為了證明上述問題，我們選用實時定量PCR來檢測顆粒

4、酶基因的改變，免疫印跡檢測顆粒酶蛋白質水平的表達變化，細胞毒活性確定顆粒酶變化與NK細胞殺傷功能的關系方法1.實時定量PCR檢測IL-2、IL-12、IL-15和IFNα對NK-92細胞系表達顆粒酶基因的影響。 2.蛋白質免疫印跡檢測IL-2和IFNα對NK-92細胞系表達顆粒酶B蛋白的影響。 3.MACS柱分離純化人外周血NK細胞。 4.流式細胞術分析人外周血NK細胞的純度。 5.小干擾RNA沉默顆粒酶

5、B基因，檢測顆粒酶B對NK細胞殺傷功能的影響。 6.MTT方法檢測NK-92細胞對K562細胞的殺傷作用。 結論: 與其它幾種顆粒酶相比，顆粒酶B對四種細胞因子的刺激更加敏感，尤其是對于IL-2。IL-15可以上調顆粒酶A和B的表達，下調顆粒酶H的表達。IL-12也可以上調顆粒酶A和B基因水平的表達。不同的是，IFNα可以上調顆粒酶K基因水平的表達。IL-2和IFNα提高NK-92殺傷能力部分依賴于顆粒酶B蛋白表