mCRC患者初始治療前CEA水平與西妥昔單抗療效相關性及其機制探討.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　第一部分：mCRC患者CEA水平與西妥昔單抗療效分析
　　目的：探討mCRC患者初始治療前血CEA水平與西妥昔單抗治療療效的相關性。
　　方法：收集并整理2013-2015年在武漢協(xié)和醫(yī)院腫瘤中心接受西妥昔單抗聯(lián)合化療的mCRC患者信息資料，以西妥昔單抗治療前CEA10ng/ml為界分為CEA升高組和CEA正常組，回顧分析mCRC患者臨床病理特征與西妥昔單抗治療療效及生存預后的關系。

2、
　　結果：按照入選標準篩選患者，共納入20例mCRC，其中CEA升高組13例，CEA正常組7例。CEA升高組接受西妥昔單抗治療后疾病控制率（DCR）高于CEA正常組（92％VS28%），組間差異具有統(tǒng)計學意義（Fisher精確檢驗， P=0.007）；而性別、年齡、腫瘤原發(fā)灶部位、轉移范圍與DCR無明顯相關。CEA升高組總生存期（OS）均值及中位數(shù)（個月）均高于CEA正常組（18.7 VS14.2，18 VS9），組間差異無統(tǒng)計

3、學意義（Log rank檢驗，P=0.339）；CEA升高組無病生存期（PFS）均值及中位數(shù)（個月）均高于CEA正常組（7.6VS5，7VS0），組間差異無統(tǒng)計學意義（Logrank檢驗，P=0.334）。
　　結論：mCRC患者治療前CEA升高組較CEA正常組在接受西妥昔單抗治療后獲得較好的DCR。比較患者接受西妥昔單抗治療后OS、PFS的均值和中位數(shù)，治療前CEA升高組較CEA正常組均高，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　第二部

4、分：EGF對LOVO細胞增殖的影響及其與CEA表達相關性分析
　　目的：觀察EGF對多種CRC細胞促增殖作用及其與細胞CEA表達相關性。
　　方法：MTT法檢測EGF對6種CRC細胞系增殖的影響；裸鼠移植瘤模型驗證EGF對CRC細胞的促增殖作用；免疫印跡技術和實時PCR分別檢測細胞CEA在蛋白質和mRNA水平的表達情況；免疫印記技術檢測EGF刺激CRC細胞系后，CEA和核內轉錄調控因子CEAR表達水平的變化；免疫組織化學技術

5、檢測皮下移植瘤組織CEA的表達情況；利用siRNA技術抑制EGFR表達后，免疫印記檢測其對EGF促進細胞CEA表達及AKT、ERK磷酸化的影響。
　　結果：EGF刺激LOVO的增殖效應顯著，呈劑量依賴性，且從緊密連接的上皮細胞樣變?yōu)殡x散的梭形間質細胞樣形態(tài)，而其它CRC細胞無明顯增殖效應，形態(tài)學無明顯變化；EGF刺激LOVO皮下移植瘤增殖效應顯著，呈時間及劑量依賴性，EGF濃度為500μg/kg/d時達到最大增殖效應；僅LOVO細

6、胞在mRNA和蛋白質水平均有CEA高表達；EGF能促進LOVO細胞CEA表達上調，并伴有CEAR表達下調；EGF實驗組皮下移植瘤組織CEA表達量明顯高于對照組；抑制LOVO細胞EGFR的表達后，可阻斷EGF對LOVO細胞CEA表達的促進作用及AKT、ERK的磷酸化激活。
　　結論：EGF僅對在mRNA和蛋白質水平均有CEA高表達的LOVO細胞有明顯的促增殖作用，并伴隨間質細胞樣形態(tài)改變，而對SW620、SW480、HT29、HCT

7、116和CACO2細胞的增殖及形態(tài)學改變無明顯影響；EGF能促進LOVO細胞CEA表達，并伴有CEAR下調；EGF通過EGFR誘導LOVO細胞AKT、ERK磷酸化和促CEA高表達。
　　第三部分：EGF對LOVO細胞增殖的影響及其與RAS、EGFR狀態(tài)相關性分析
　　目的：觀察EGF對CRC細胞促增殖作用的大小及其與細胞RAS突變和EGFR表達的相關性。
　　方法：對6種CRC細胞進行RAS和BRAF基因測序；予以EG

8、F刺激后，免疫印記檢測CRC細胞的AKT、ERK磷酸化狀態(tài)；檢測6種CRC細胞EGFR表達狀態(tài)。
　　結果：LOVO和HCT116為KRAS G13D突變，SW620和SW480為KRAS G12V突變，HT29和CACO2均無RAS、BRAF突變；除SW620外，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2細胞均有EGFR高表達，而且接受EGF刺激后，LOVO、SW480、HT29、HCT116和CACO2細胞AKT