赤點石斑魚MHC基因的克隆與多態(tài)性分析.pdf

1、主要組織相容性復合體(Major histocompatibility complex，MHC)是免疫系統(tǒng)中對蛋白抗原異物起反應的一類重要的免疫因子，廣泛分布于各種脊椎動物體內。本研究以我國具有重要經(jīng)濟價值和養(yǎng)殖前景的赤點石斑魚(Epinephelusakaara)為實驗材料，采用PCR、RT-PCR、SMART-RACE、SSCP等技術對MHC家族MHCⅠA、MHCⅡA和MHCⅡB3個基因進行克隆與多態(tài)性分析。主要結果如下：

2、1．本研究首次成功克隆獲得赤點石斑魚的MHC classⅠα鏈，MHC classⅡα鏈及β鏈等3個重要的非特異性免疫因子的cDNA全序列，其中MHC classⅠα鏈全長1720bp，含3’UTR、啟動子、多肽結合區(qū)(α1和α2)、免疫球蛋白樣區(qū)(α3)、跨膜區(qū)、胞內區(qū)和5’UTR。MHC classⅡα鏈全長1870bp，含3’UTR、啟動子、多肽結合區(qū)(α1)、免疫球蛋白樣區(qū)(α2)、跨膜區(qū)、胞內區(qū)和5’UTR。MHC class

3、Ⅱβ鏈全長1350bp，含3’UTR、啟動子、多肽結合區(qū)(β1)、免疫球蛋白樣區(qū)(β2)、跨膜區(qū)、胞內區(qū)和5’UTR。 2.3個免疫蛋白因子均具有經(jīng)典MHC蛋白分子的空間結構，在多肽結合區(qū)均存在極其豐富的變異。其中Ⅰα鏈的α1(1-90位)和α2(91-203位)分別由1個α螺旋和4個反向平行的β折疊組成，形成1個深溝狀凹槽，α3(204-298位)主要由β折疊組成。Ⅱα鏈的α1(24～99位)由1個α螺旋和4個反向平行的β折疊

4、組成，α2(100～200位)由多個β折疊組成。Ⅱβ鏈的β1(20～103位)1個α螺旋與4個反向平行的β折疊構成多肽結合區(qū)，β2(116～204位)由多個β折疊構成兩個反向平行的三明治結構。 3.3個非特異性免疫因子在腦、心、脾、肝、頭腎、腸、肌肉、血細胞、胸腺、性腺，鰓，胃等12個組織均能有效表達，在頭腎，脾，胸腺等免疫組織表達量不僅高，而且表達多態(tài)性也異常豐富。遞呈內源性抗原的MHC classⅠ在與外界病原接觸較多的鰓，

5、肌肉，腸等組織表達較弱，而遞呈外源性抗原的MHCclassⅡ在鰓，肌肉，腸等組織則有較強表達，體現(xiàn)了其表達與功能的適應性。 4．建立了利用SSCP技術分離多肽MHC基因片段的方法，極大提高了MHC多態(tài)性基因的檢測效率。本研究所獲得的SSCP特異性引物及其建立的檢測方法，將可為今后大量檢測赤點石斑魚多態(tài)性MHC序列，篩選可針對特定病原的特異序列提供有力的工具。 5．根據(jù)3個分子的IGC區(qū)氨基酸序列構建了脊椎動物的系統(tǒng)進化樹