姜黃素調節(jié)Wnt-β-catenin信號通路影響軟骨細胞增殖的研究.pdf

1、背景:骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種以退行性關節(jié)軟骨病變及繼發(fā)性骨質增生為主要病理表現(xiàn)的慢性骨關節(jié)疾病，多年來一直困擾著中老年人的健康，有年輕化的趨勢。長久以來，中醫(yī)藥在治療骨科疾病方面有著獨特的優(yōu)勢，其防治骨關節(jié)炎近幾年成為研究的大熱點。姜黃是治療骨傷疾病復方中的一味常用中藥，對治療骨關節(jié)炎有良好的療效。在骨關節(jié)炎發(fā)生發(fā)展過程中，伴隨著軟骨細胞中諸多信號通路信號因子的激活和抑制，其中較為重要的通路便是Wnt/β-

2、catenin。在骨關節(jié)的生長、保護、修復過程中，Wnt/β-catenin通路起著至關重要的作用。
　　目的:探索姜黃素調控Wnt/β-catenin信號通路對軟骨細胞增殖的效應機制，在分子生物水平上進一步闡釋中醫(yī)藥治療骨關節(jié)炎的作用機理，證實中藥提取物在醫(yī)學組織工程學及分子生物學中的應用價值。
　　方法:1.清潔級4周齡新西蘭大白兔雌雄各1只，用于建立體外培養(yǎng)軟骨細胞的取材，應用形態(tài)學觀察、甲苯胺藍染色等方法進行細胞形態(tài)

3、學鑒定;2.用MTT法分析第1～5代軟骨細胞10天內(nèi)增殖情況，繪制增殖曲線;3.用CCK-8法檢測各濃度姜黃素給藥24h對軟骨細胞增殖的影響;4.用Western blot法分析檢測5μmol·L-1、10μmol·L-1姜黃素分別加藥10μl于軟骨細胞作用12h、24h后，Wnt/β-catenin信號通路中Wnt2、GSK-3β、β-catenin相關因子的蛋白表達情況。
　　結果:
　　(1)各代軟骨細胞初培養(yǎng)的前2天

4、OD值未見明顯差異(P＞0.05)，均生長較為緩慢，等到第3天增殖明顯加快，第4天達到對數(shù)增長期，第5天后增殖開始減慢，第7天后生長速度趨見平穩(wěn)，細胞生長進入平臺期，第9天增殖率較前下降，生長出現(xiàn)停滯。
　　(2)25、20、10、5μmol·L-1姜黃素組，藥物顏色干擾影響小，指標相對客觀準確，與DMSO空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。隨著姜黃素濃度的降低，OD值呈現(xiàn)上升趨勢，當姜黃素濃度在10

5、μmol·L-1時，OD值達頂峰，之后隨著藥物濃度的降低，OD值也降低。排除160、80、40μmol·L-1三組高誤差，發(fā)現(xiàn)10μmol·L-1姜黃素組顯示的OD值最高。
　　(3)24h姜黃素組的Wnt2及β-catenin蛋白表達量明顯高于DMSO對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中10μmol·L-1劑量組相對于5μmol·L-1劑量組具有更高的蛋白表達量。相同濃度組之間，作用24h的Wnt2及β-cateni

6、n蛋白表達量明顯高于12h，差異也具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。12h姜黃素組的Wnt2及β-catenin蛋白表達量略高于DMSO對照組，但差異不明顯(P＞0.05)。GSK-3β結果則正好與上述兩種蛋白表達結果相反。
　　結論:
　　(1)軟骨細胞傳代穩(wěn)定性最高的為第3代。
　　(2)姜黃素對軟骨細胞具有促進增殖的效果，且濃度在10μmol·L-1促增效果相對最佳，同樣給藥10μmol·L-1作用24h比12h更