基因RUNX3對肺癌細胞株A549體外作用的研究.pdf

1、目的:本研究采用質粒載體介導的人類RUNT相關轉錄因子3(runt related transcription factor3)在體外通過脂質體感染肺癌細胞株A549，并檢測基因對肺癌細胞的增殖、遷移、凋亡的作用。探索基因RUNX3對肺癌增殖、遷移、凋亡的影響，探究潛在的靶向治療肺癌新靶點。
　　方法:(1)本次實驗對四個分組的A549細胞株進行研究，四個分組分別設置為實驗組、陽性對照組、陰性對照組和空白組，實驗組中加入過表達的R

2、unx3質粒和脂質體Lipofectamine(R)2000;陽性對照組中加入空載質粒和脂質體Lipofectamine(R)2000;陰性對照組中加入脂質體Lipofectamine(R)2000;空白組中只有1640培養(yǎng)基;(2)將過表達RUNX3（EGFP-RUNX3）和質粒(EGFP-NC)擴增提取;(3)通過脂質體Lipofectamine(R)2000轉染過表達RUNX3基因的質粒載體（eGFP-RUNX3）并為實驗組、Li

3、pofectamine(R)2000轉染空載質粒(eGFP-NC)為設為陽性對照組、單加Lipofectamine(R)2000為陰性對照組、單加無血清培養(yǎng)基1640為空白對照組進行實驗;(4)使用QPCR檢測不同組別的RUNX3 mRNA表達量;(5)使用CCK-8試劑盒檢測不同組別的細胞增殖情況;(6)應用Transwell小室實驗檢測不同組別的細胞株遷移侵襲情況;(7)使用流式細胞學檢測不同組別的細胞凋亡情況。
　　結果:(

4、1)本次研究成功提取到過表達Runx3基因質粒和空載質粒，并成功轉染到細胞株;(2)熒光定量PCR(QPCR)技術檢測結果顯示實驗組Runx3基因的mRNA表達量最高，顯著高于各個對照組(P＜0.01);(3)CCK-8法分別測定(12h24h48h72h96h)各組的細胞增殖，結果表明各種細胞隨著時間的推移均呈現(xiàn)上升趨勢，在增殖實驗中轉染后72小時實驗組過表達RUNX3OD值(0.883±0.15)，陽性對照組(1.638±0.17)

5、，陰性對照組(1.631±0.12)，空白組(1.788±0.18)，實驗組明顯低于各個對照組(P＜0.01);(4)侵襲實驗中在200倍高倍鏡下隨機選取三個視野統(tǒng)計平均細胞數(shù)量，實驗組，陽性對照組，陰性對照組，空白組分別為(28±3.33)，(100±2.66)，(110±2.33)，(180±3.66)，實驗組明顯低于各個對照組(P＜0.01);(5)AnnexinV/PI雙染色法檢測各組細胞凋亡及壞死比例，結果示實驗組、陽性對照組