食管鱗癌患者血漿cfDNA與臨床病理特征及新輔助化療應答相關性的研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)食管癌的發(fā)病率依然在升高，在我國等發(fā)展中國家中，近十年來食管癌的發(fā)病率依然居高不下，并且在亞洲地區(qū)食管癌組織類型以鱗狀細胞癌為主要類型。手術切除、化療和放療依然是目前食管癌的主要治療手段，盡管近幾十年食管癌治療手段取得了長足的進步，但是治療效果依然欠佳，這主要歸因于早期食管癌缺乏特異性的臨床癥狀和體征，同時缺乏準確的生物學標志物，這導致食管癌發(fā)現(xiàn)伊始便是中晚期。對于中晚期的食管癌患者，單純的手術治療無法達到生物學意義上的根治，

2、多學科綜合治療成為中晚期腫瘤患者主要治療方式。新輔助化療及靶向治療作為近年來一種廣受關注的治療手段，尤其在進展期食管癌中，其臨床價值已經(jīng)逐漸獲得廣泛認可，但是對其療效評估和患者群體選擇依然存在很多爭議。當前在食管癌診斷和監(jiān)測中仍然缺乏有效的生物學標志物。在第二代測序技術的發(fā)展下，使用日益完善的各類新型技術手段，探尋新的化療療效評估標志物，無創(chuàng)、精確、高效的對食管癌患者進行預測與分類，是精準醫(yī)學指導下食管癌多學科綜合治療的熱點方向，具有重

3、要的臨床意義。
　　目前，多項研究結果提示游離DNA(cell free DNA，cfDNA)在肺癌、結直腸癌、肝癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤患者的外周血中存在，并且與腫瘤負荷及預后相關，但在食管癌中應用價值的研究較少。近年已有研究報道食管癌患者的外周血中可以檢測到腫瘤相關的cfDNA，并且血漿cfDNA檢測可以作為評價食管癌手術效果的非侵襲性的生物標志物，而基于第二代測序技術的cfDNA檢測用于預測食管癌患者的化療療效和預后的研究還

4、未見報道。本研究擬通過監(jiān)測食管癌患者初治時外周血中cfDNA的含量及食管癌相關突變基因的檢測，研究cfDNA與食管鱗癌患者臨床特征及病理學特征之間的關系，同時根據(jù)食管鱗癌外周血cfDNA中腫瘤相關基因變化情況作為食管癌患者化療療效和預后評估的伴隨診斷指標的潛在可能。
　　第一部分食管鱗癌患者血漿游離DNA含量與患者臨床及病理學特征相關性的研究
　　目的:
　　初步探討食管鱗癌患者血漿cfDNA含量與患者臨床病理特征的相

5、關性。
　　方法:
　　收集2015年1月-2015年3月河南省腫瘤醫(yī)院胸外科一區(qū)收治的食管鱗癌患者初治時血漿樣本共30例。采用磁珠兩步法提取患者血漿cfDNA，分析血漿cfDNA含量和患者臨床及病理學特征的相關性。
　　結果:
　　納入本研究的30例食管癌患者中，所有患者cfDNA以Nanodrop法定量分析，檢測成功率為100％，測得30例食管癌患者血漿cfDNA濃度為0.182±0.107ng/ul(0.0

6、9-0.51ng/ul)，其中≥60歲、＜60歲兩組食管癌患者血漿游離DNA濃度分別為0.188±0.104ng/ul、0.174±0.116ng/ul(p=0.764);男性患者、女性患者血漿cfDNA濃度分別為0.178±0.094ng/ul、0.210±0.188ng/ml(p=0.058);有和沒有吸煙史的食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.1040ng/ul和0.180±0.115ng/ul(p=0.823);

7、有和沒有飲酒史的食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.108ng/ul和0.181±0.109ng/ul(p=0.830);有和沒有惡性腫瘤家族病史的食管癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.208±0.155ng/ul和0.176±0.095ng/ul(p=0.097);食管胸上、中、下段癌患者血漿cfDNA濃度分別為:0.231±0.045ng/ul、0.161±0.067ng/ul和0.130±0.018ng/ul(p=

8、0.559);Ⅱa、Ⅱb、Ⅲa、Ⅲb期食管鱗癌患者血漿cfDNA濃度分別為0.184±0.108ng/ul、0.178±0.094ng/ul、0.181±0.109ng/ul、0.161±0.067ng/ul(p=0.102);高、中、低分化的三組患者血漿cfDNA濃度分別為0.157±0.078ng/ul、0.185±0.110ng/ul、0.199±0.131ng/ul(p=0.449);按T1-2和T2-4分組，兩組患者的血漿游離

9、DNA濃度分別為0.175±0.122ng/ul和0.186±0.186ng/ul(p=0.964)有無淋巴結轉移的患者血漿cfDNA濃度為0.168±0.063ng/ul、0.193±0.132ng/ul(p=0.058);以腫瘤體積中位數(shù)將患者分為大腫瘤組和小腫瘤組，兩組患者的血漿cfDNA濃度分別為0.220±0.132ng/ul和0.145±0.056ng/ul(p=0.006)。通過相關性分析cfDNA水平與腫瘤TNM綜合分期

10、無相關性，與腫瘤體積大小呈正相關(r=0.381，P=0.038)。
　　結論:
　　食管鱗癌血漿cfDNA水平與其腫瘤負荷呈正相關，與患者性別、年齡、吸煙飲酒史、惡性腫瘤家族史、腫瘤部位、腫瘤侵潤深度、淋巴結轉移情況以及腫瘤分期無顯著性相關性。
　　第二部分化療敏感基因SNP聯(lián)合外周血ctDNA檢測對食管鱗癌患者新輔助化療優(yōu)勢人群篩選的價值
　　目的:
　　篩選食管鱗癌新輔助化療敏感基因SNP，初步探討聯(lián)

11、合多基因SNP和ctDNA對患者化療敏感性進行預測的可行性，從而進行藥物的合理選擇，為實現(xiàn)食管癌患者個體化新輔助化療提供重要的理論依據(jù)。
　　方法:
　　回顧性分析2016年3月至2016年5月期間在河南省腫瘤醫(yī)院胸外科一區(qū)進行新輔助化療的患者的臨床資料，納入新輔助化療療效評價為CR/PR和PD/SD的患者各7例，收集兩組患者的相關臨床資料和病理學資料，從河南省腫瘤醫(yī)院胸外科生物標本庫內(nèi)調取納入本研究的14例患者的血標本。提

12、取血漿中游離DNA，分析化療敏感組和耐藥組患者的血漿cfDNA基因變異譜的差異。
　　結果:
　　化療敏感患者和化療不敏感患者血漿cfDNA中基因變異存在顯著性差異，且兩組患者的腫瘤基因突變負荷結果有顯著性差異(p=0.0062)，化療不敏感組具有較高的基因突變負荷。信號通路分析提示p53信號通路是化療敏感組及耐藥組腫瘤負荷差異基因富集最多的信號通路。化療敏感組和不敏感組患者外周血cfDNA基因拷貝數(shù)變化、差異性分析結果顯示