金屬硫蛋白對(duì)環(huán)磷酰胺免疫毒性保護(hù)作用的研究.pdf

1、環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）是臨床廣泛使用的抗腫瘤藥物，對(duì)多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、宮頸癌、卵巢癌等惡性腫瘤均具有療效。但它對(duì)皮膚、呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等造成的毒副作用嚴(yán)重限制了其在臨床上的使用。免疫系統(tǒng)作為機(jī)體的防御系統(tǒng)，在抵抗外源性細(xì)菌、病毒的侵犯中起著關(guān)鍵的作用，對(duì)于腫瘤患者治療后的免疫重建也尤其重要。因此，尋找對(duì)抗CP免疫毒性的方法，擴(kuò)大其使用范圍、提高腫瘤治療效果是非常必要的。金屬硫蛋白（Meta

2、llothionein，MT）是一種能被多種外源性刺激誘導(dǎo)的小分子量蛋白，具有解毒重金屬、調(diào)控微量元素以及防輻射等多種生理功能。MT對(duì)外源因素產(chǎn)生的機(jī)體損傷有一定的保護(hù)效果，這可能是通過(guò)降低機(jī)體的氧化損傷程度，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)實(shí)現(xiàn)的。鑒于CP主要是通過(guò)DNA烷基化產(chǎn)生細(xì)胞毒性，本研究旨在探討MT能否在一定程度上保護(hù)機(jī)體對(duì)CP產(chǎn)生的免疫毒性，為提高CP的臨床用藥效果提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　本研究用MT-/-和MT+/+小鼠進(jìn)

3、行環(huán)磷酰胺染毒，通過(guò)觀察外周血、骨髓、胸腺以及脾臟等免疫器官的損傷情況，從氧化損傷和DNA損傷修復(fù)兩方面考查MT對(duì)CP所致免疫抑制毒性的保護(hù)作用及可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠給予CP后，外周血、骨髓、脾臟和胸腺等均發(fā)生不同程度的損傷。具體表現(xiàn)為：白細(xì)胞計(jì)數(shù)降低、微核率升高以及臟器、臟腦系數(shù)下降；且MT-/-小鼠對(duì)CP導(dǎo)致的以上指標(biāo)的變化更加敏感。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，脾臟和胸腺中MT-/-小鼠的MDA含量高于MT+/+小鼠；脾臟和胸腺中GS

4、H-Px活力均呈降低趨勢(shì)，且MT-/-小鼠該酶活力降低更加顯著；脾臟中MT-/-小鼠SOD活力升高顯著，而 MT+/+小鼠胸腺中該酶活力在下降，在 MT-/-小鼠中該酶活力降低。以上結(jié)果表明，與MT+/+小鼠相比，MT-/-小鼠發(fā)生更加嚴(yán)重的氧化損傷。Nrf2/ARE抗氧化通路是保護(hù)機(jī)體氧化損傷的重要通路，在本研究中，我們以脾臟和胸腺為研究對(duì)象，對(duì)該通路中Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白進(jìn)行了分子水平上的檢測(cè)。結(jié)果表明，染毒CP導(dǎo)致N

5、rf2蛋白表達(dá)量增加，MT-/-小鼠中該蛋白增加顯著，其下游蛋白HO-1和NQO-1也有類似的趨勢(shì)。這些結(jié)果提示，MT可能通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路改變氧化損傷相關(guān)酶的活性，從而對(duì)CP的免疫毒性產(chǎn)生保護(hù)作用。外周血彗星實(shí)驗(yàn)表明，染毒 CP后 DNA發(fā)生嚴(yán)重的損傷。磷酸化組蛋白（γH2AX）是DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志之一，我們的結(jié)果表明，MT-/-小鼠該蛋白的表達(dá)量明顯高于MT+/+小鼠。進(jìn)一步檢測(cè)了DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白ATM、P53和P21

6、的表達(dá)和磷酸化活化情況。結(jié)果顯示，給予CP引起ATM和P53活化形式增加，且MT-/-小鼠中該蛋白表達(dá)量更高。P53下游分子P21雖然在染毒后表達(dá)量增加，但MT-/-小鼠組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。這些結(jié)果提示，MT能夠保護(hù)CP所致的DNA損傷，并且可能通過(guò)改變ATM、P53和P21等DNA損傷修復(fù)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而降低CP對(duì)機(jī)體的免疫抑制毒性。本研究中，CP能夠?qū)π∈螽a(chǎn)生免疫抑制毒性，而MT能夠減輕CP所致的免疫抑制毒性。通過(guò)