鮑曼不動桿菌突變株中耐多粘菌素相關基因的定位與驗證.pdf

1、鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii）是今年WHO剛剛公布的“耐藥性最強的TOP12”中的第一位，其對幾乎所有結構類別的抗生素產生耐藥。多粘菌素被認為是治療鮑曼不動桿菌的“最后一道防線”，但多粘菌素治療鮑曼不動桿菌感染亦存在諸多問題。盡管臨床分離到的鮑曼不動桿菌均表現(xiàn)為多粘菌素敏感型，但采用多粘菌素治療鮑曼不動桿菌感染的失敗率高達35％，表明醫(yī)院內的治療失敗與傳統(tǒng)的耐藥菌無關，可能與多粘菌素劑量不足引起細菌產生適

2、應性耐藥相關。因此，我們猜測鮑曼不動桿菌基因組可能存在“耐藥抑制基因”，在改變外在環(huán)境的情況下，“耐藥抑制基因”被“沉默”了，所以細菌變得耐藥。為了驗證“耐藥抑制基因”這個想法，我們聯(lián)合mariner轉座和多粘菌素篩選到一些耐藥突變株，定位并證明“耐藥抑制基因”的存在，為后續(xù)耐藥機制的研究打下基礎。
　　本研究以利用mariner轉座系統(tǒng)聯(lián)合多粘菌素構建的耐多粘菌素的突變株為研究樣本，首先采用反向PCR技術定位出部分耐多粘菌素突變

3、株的mariner轉座子插入位點，將被中斷的耐藥相關基因克隆入回補載體（pSUTetAB）中，然后將各自的回補質粒轉入相應的突變株中，檢測突變株和回補突變株對多粘菌素的最低抑菌濃度（MIC）的變化，找出耐藥相關性較好的基因，采用RecETab重組系統(tǒng)定點敲除該基因，進一步通過表型驗證該基因位點與耐藥相關性。最后采用細菌雙雜交技術對該位點進行耐藥機理的初步探索。
　　本研究成功采用反向PCR技術定位出耐多粘菌素突變株的6個轉座插入位