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文檔簡介
1、造血干/祖細胞(hemtopoietic stem progenitor cells,HSPCs)在治療貧血等血液疾病、白血病等癌癥病人的造血重建、基因治療和免疫治療等方面有極重要的臨床應用價值,因此多年來一直得到科研工作者和臨床醫(yī)生的高度重視和關注。雖然前人對HSPCs的體外擴增已經(jīng)做了大量的實驗研究,但由于培養(yǎng)條件對HSPCs體外擴增的影響非常復雜,在不同的培養(yǎng)條件下,擴增效果差別很大,眾多的影響參數(shù)均需要深入研究。 造血干
2、/祖細胞與基質(zhì)細胞共培養(yǎng)時的有效作用距離還是一個懸而未決的問題,為此,本文采用修正的transwell改變臍帶血來源的造血干/祖細胞(HSPCs)和人脂肪組織來源的脂肪干細胞(adipose derived stem cells,ADSCs)的作用距離,獲得最佳的細胞共培養(yǎng)距離。采用的方法是在無菌條件下采集正常足月產(chǎn)婦臍帶血,與PBS緩沖液1:1等體積混合,利用Ficoll分離液(1.077g/ml)密度梯度離心(2500rpm,25m
3、in)收獲單個核細胞(mononuclear cells,MNCs)。共培養(yǎng)時先將ADSCs以2×105cells/ml密度接種到六孔板中,然后將收獲的MNCs以1×108cells/ml密度接種到transwell小室內(nèi),所用的培養(yǎng)基是添加12.5%胎牛血清FBS和12.5%馬血清HS的IMDM,最后將transwell小室放到調(diào)節(jié)好HSPCs和ADSCs之間的作用距離的六孔板中進行7天的共培養(yǎng)。其間每24小時進行細胞計數(shù),觀察細胞形
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