復方褐藻素軟膏抗實驗性痤瘡及THP-1細胞炎癥機制的研究.pdf

1、目的:
　　通過家兔痤瘡模型，觀察復方褐藻素軟膏主要成分褐藻素對痤瘡炎癥反應的干預效果，觀察復方主要成分褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿、黃芩苷和復方對痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌效果，同時通過Elisa、Western blot觀察痤瘡丙酸桿菌活菌誘導單核細胞系THP-1細胞炎癥因子的表達，初步探討復方各主要成分抗炎作用機制，從而闡明復方褐藻素軟膏及其主要成分在治療痤瘡，改善痤瘡炎癥反應的作用機制，為進一步進行復方褐藻素軟膏開

2、發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　1.制備Kligman兔耳痤瘡模型，造模14d，驗證造模成功后，隨機將實驗組的9只雄性家兔隨機分為A組、B組、C組，每組3只，并編號。A組涂超純水，B組涂2％褐藻素試劑，C組涂4％褐藻素試劑，用無菌棉簽均勻涂布于每只家兔耳內(nèi)側(cè)面耳導管開口處約2 cm×2 cm范圍，每天1次，每次0.7 mL，并且用溫水擦拭前一次的涂藥部位，連續(xù)涂14d，末次涂12 h后，觀察并拍照，處死，取材，制作病理切片

3、，記錄數(shù)據(jù)，并整理分析。
　　2.復方褐藻素軟膏各主要成分的體外抑菌試驗。選取了痤瘡發(fā)生、發(fā)展過程中最常見的痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌進行體外抑菌試驗，用瓊脂擴散法，設置不同濃度的褐藻素、丹參酮組、小檗堿、黃芩苷和復方的受試藥物溶液，分別觀察不同濃度的抑菌效果，用十字交叉法測量抑菌圈，記錄數(shù)據(jù)。
　　3.復方褐藻素軟膏主要成分對痤瘡丙酸桿菌感染THP-1細胞激活炎癥因子信號通路的調(diào)控。通過Elisa、Western blo

4、t，觀察活菌P.acnes刺激人源性單核細胞系THP-1細胞12h后細胞因子IL-8、TLR2、P-NF-kB p65的表達水平，初步探討P.acnes活菌誘導THP-1細胞炎癥因子的表達，進行復方主要成分丹參酮ⅡA、褐藻素防治痤瘡炎癥反應的機制研究。
　　結(jié)果:
　　1.制備家兔痤瘡模型，在褐藻素低、高兩個劑量組分別給藥后，與對照組對比，給藥組均有緩解痤瘡癥狀的作用，試驗提示褐藻素可以減少家兔痤瘡模型炎癥反應，并具有一定的

5、劑量依賴性。
　　2.用瓊脂擴散法，設置不同濃度的褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿、黃芩苷和聯(lián)合組，分別觀察不同濃度的抑菌效果，用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并拍照，記錄和分析試驗結(jié)果，試驗結(jié)果提示復方褐藻素軟膏各主要成分在不同濃度時，對痤瘡丙酸桿菌和金黃葡萄球菌均呈現(xiàn)不同程度的抑制作用。
　　3.通過Elisa、Western blot的實驗方法推斷復方主要成分對痤瘡丙酸桿菌誘導THP-1細胞炎癥因子表達及其抗炎作用機制。痤瘡丙

6、酸桿菌刺激后，THP-1細胞的IL-8分泌量明顯升高;與單純的痤瘡丙酸桿菌誘導組對比，褐藻素、丹參酮ⅡA給藥明顯抑制了痤瘡丙酸桿菌誘導后THP-1細胞內(nèi)TLR2、P-NF-kB p65、IL-8的表達。
　　結(jié)論:
　　1.褐藻素的高、低劑量組可以改善家兔痤瘡模型角質(zhì)化，改善炎癥癥狀，表明復方褐藻素具有防治痤瘡和改善其炎癥反應的作用。
　　2.在試驗濃度內(nèi)，復方褐藻素軟膏及其主要成分褐藻素、丹參酮Ⅱ A、小檗堿和黃芩苷