胰島聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療糖尿病大鼠的研究.pdf

1、以標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病大鼠為模型，探索同種異體的SD大鼠胰島聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone Marrow Mesenchymal Cells,BMSCs)能否提高治療糖尿病的遠(yuǎn)期療效，為臨床開(kāi)展胰島聯(lián)合BMSCs移植治療糖尿病的提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并觀察同種異體大鼠聯(lián)合BMSCs移植后細(xì)胞在體內(nèi)的分布、歸巢情況，為臨床細(xì)胞移植后細(xì)胞的定植、歸巢提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴鏈脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）構(gòu)建大鼠糖

2、尿病模型；貼壁法分離、培養(yǎng)BMSCs，免疫熒光法和流式細(xì)胞鑒定BMSCs的表面抗原（CD44、CD34、CD90、CD45、CD29）；膠原酶法分離大鼠胰島，雙硫腙法(Dithizone，DTZ)鑒定胰島細(xì)胞；將細(xì)胞分為對(duì)照組；BMSCs培養(yǎng)組；單獨(dú)胰島組；胰島與BMSCs共培養(yǎng)組，于培養(yǎng)后的第1、3、7天取其上清液進(jìn)行ELISA法檢測(cè)各組的胰島素與C-肽的分泌；18F-FDG體外標(biāo)記胰島與BMSCs，隨機(jī)將糖尿病大鼠分成：對(duì)照（n=1

3、5)、單獨(dú)胰島移植組（n=15)、單獨(dú)BMSCs移植組（n=15)、胰島與BMSCs聯(lián)合移植(n=15)，經(jīng)門(mén)靜脈移植分別移植（對(duì)照組0.2ml生理鹽水；胰島組0.2ml胰島500IEQ/100g；干細(xì)胞組0.2ml的3*10^5/100g個(gè) BMSCs；聯(lián)合組0.1ml胰島500IEQ/100g+0.1ml3*10^5/100g個(gè)BMSCs)。移植后的第1、3、7、14、30天每組每次均隨機(jī)處死3只大鼠，取肝臟、血液，ELISA測(cè)量移

4、植后各組大鼠血清的胰島素與C-肽的含量及檢測(cè)大鼠的血清的肝功能，免疫熒光法了解肝組織內(nèi)胰島素的表達(dá)情況，HE檢測(cè)肝臟的病理情況，PET-CT示蹤移植入體內(nèi)的細(xì)胞分布情況。⑵經(jīng)STZ法誘導(dǎo)糖尿病大鼠期間有95％的大鼠血糖濃度在一周內(nèi)有3天連續(xù)高于16.8mmol/L的，伴隨體重下降，總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶均升高；經(jīng)全貼壁法培養(yǎng)的BMSCs大多是呈長(zhǎng)梭形生長(zhǎng)，免疫熒光法的檢測(cè)結(jié)果顯示BMSCs為CD44陽(yáng)性，CD34陰性，流式細(xì)胞

5、儀測(cè)量結(jié)果表明BMSCs是高表達(dá)CD90、CD29，低表達(dá)CD45的；膠原酶法能夠很有效的分離出胰島細(xì)胞，且被DTZ染成猩紅色的就是胰島細(xì)胞，未被染成猩紅色的就是外分泌腺；體外共培養(yǎng)中的胰島形態(tài)與單獨(dú)胰島的形態(tài)相比保存的更好，存活的時(shí)間也更長(zhǎng)，胰島素與C-肽的分泌也較單獨(dú)胰島的高；移植后聯(lián)合組的血糖在正常血糖內(nèi)波動(dòng)一個(gè)月，單獨(dú)胰島組的血糖水平只能在正常血糖范圍波動(dòng)3天，單獨(dú)BMSCs組、對(duì)照組的大鼠在移植后的血糖水平未明顯降低。聯(lián)合組在

6、移植后的第1、7、14、21、30天的血糖明顯低于單獨(dú)胰島組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組比胰島組能有效的修復(fù)肝臟的功能；聯(lián)合組的胰島素與C-肽的分泌也比單獨(dú)胰島組高；聯(lián)合組和單獨(dú)胰島組的炎細(xì)胞侵潤(rùn)都不明顯。PET-CT結(jié)果顯示，BMSCs主要均勻分布在肝臟的右肝，胰島主要聚集在肝門(mén)靜脈末端分支，且BMSCs圍繞在胰島的周?chē)?，?duì)照組的肝臟無(wú)明顯的顯影。⑶同種異體的胰島聯(lián)合BMSCs治療大鼠糖尿病的效果優(yōu)于單獨(dú)胰島移植。PET