冠心清化散抗動脈粥樣硬化機理及對血管內(nèi)皮細胞的保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　本研究以冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的兩個關鍵點——動脈壁脂質(zhì)沉積及細胞的異常增殖為切入點，通過冠心清化散在防治兔動脈粥樣硬化作用研究，探討其抗動脈粥樣硬化的作用機制，為“瘀能化水”理論提供可靠地實驗證據(jù)。
　　方法:
　　1、動脈粥樣硬化家兔模型建立與評價:
　　16只普通級純種雄性新西蘭家兔，適應性飼養(yǎng)2周后，隨機分為空白組（8只）及模型組（8只），繼空白組給予普通飼料喂養(yǎng);模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)+

2、免疫損傷以制備實驗性動脈粥樣硬化模型。連續(xù)喂養(yǎng)10周。檢測血清總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)水平;觀察主動脈弓整體油紅0染色結果，以此判定造模成功與否。

3、　　2、冠心清化散對動脈硬化家兔血脂及斑塊的影響:
　　60只普通級純種雄性新西蘭家兔，適應性飼養(yǎng)2周后，隨機分為空白組、模型組、陽性藥物組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，各10只。除空白組外，其余組給予高脂飼料喂養(yǎng)+免疫損傷制備實驗性動脈粥樣硬化模型。同時中藥低、中、高劑量組分別以6.7g/kg/d、13.4g/kg/d、26.8g/kg/d，予冠心清化散懸液灌胃;陽性藥物組予辛伐他汀懸液灌胃3mg/kg/d灌胃，連

4、續(xù)灌胃觀察12周。檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;觀察主動脈弓整體油紅O染色結果。
　　3、冠心清化散抗動脈粥樣硬化機理研究
　　采用雙抗夾心ELISA酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清超氧化物歧化酶活性(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)。
　　采用Western blot法檢測還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)、氧化酶p22phox蛋

5、白、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、ATP結合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1(ABCA1)、ATP結合盒轉(zhuǎn)運蛋白G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受體(SR-B1)、CD36表達。
　　采用RT-PCR法檢測Nox4、p22phox蛋白、PPARγ、ABCA1、ABCG1、SR-B1、caveolin-1mRNA表達。
　　4、冠心清化散對血管內(nèi)皮細胞的保護作用
　　采用Western blot方法檢測堿性成纖維細胞生長因

6、子(basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)與細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular regulated kinase1/2，ERK1/2)、成纖維細胞生長因子受體1(Fibroblast growth factor receptors1，F(xiàn)GFR1)、p21ras蛋白的表達。
　　結果:
　　1、采用高脂飼養(yǎng)加免疫損傷法成功建立兔動脈粥樣硬化模型。
　　2、冠心清化散中、

7、高劑量組可降低動脈粥樣硬化兔的TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C的水平。其降脂效果同辛伐他汀(P＞0.05)。陽性藥物組與高、中、低劑量組雖見到脂質(zhì)條紋形成，但陽性藥物組與中、高劑量組較模型組相比，內(nèi)膜紅色斑片狀區(qū)明顯減少，與模型組的紅色粥樣斑塊形成鮮明對比。
　　3、冠心清化散可有效升高SOD含量、降低MDA含量（P＜0.05），但中劑量組效佳;可有效減少Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶活性，降低動脈氧化應

8、激水平。
　　4、冠心清化抑制CD36的表達;提高ABCA1、ABGA1、SR-B1;減少PPARγ表達。
　　5、冠心清化散可降低FGFR1、bFGF、p21ras、ERK1/2的蛋白表達。
　　結論:
　　1、冠心清化散可明顯改善動脈粥樣硬化兔的血脂水平;減少內(nèi)膜脂質(zhì)條紋、動脈粥硬化斑塊的形成。
　　2、冠心清化散抗動脈粥樣硬化機制之一可能為抗氧化應激:調(diào)控Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶